1、 1 曲茎石斛培养基播种育苗技术规程 河南省地方标准编制说明 一、工作简况 1、任务来源 2015 年 10 月，南阳市黄石庵林场承担了中央财政林业科技示范推广项目“河南珍稀濒危石斛植物林下种植推广示范基地建设”任务，并向河南省林业厅签订了中央财政林业科技推广示范项目合同书（编号 :GTH(2015)03 号），经国家财政部和国家林业局批准 ,以财政部关于拨付 2015 年林业补助资金的通知（财农 201581号），落实资金 100 万元， 2017 年 10 月 23日项目实施结束，并经河南省林业厅组织专家现场查定通过。在合同书 中黄石庵林场承诺项目结束后，编制曲茎石斛培养基播种育苗技术规程
2、。 2018 年 3月，国有南阳市黄石庵林场向河南省质量技术监督局提交了关于曲茎石斛培养基播种育苗技术规程河南省地方标准申请书，根据河南省质量技术监督关于下达 2018年第一批河南省地方标准修订计划（豫质监标发 2018263 号）文，获得立项（立项编号： 20181210117）。 2、起草单位 曲茎石斛培养基播种育苗技术规程由南阳市黄石庵林场和河南伏牛山国家级自然保护区黄石庵管理局主持起草，具体分工如下表 : 2 表 1. 主要起草人及任务分 工如下表 姓名 性别 职务 /职称 工作单位 任务分工 高立献 男 副场长 /高级工程师 国有南阳市黄石庵林场 项目主持，标准起草 贾 赛 男 工程
3、师 国有南阳市黄石庵林场 试验设计及标准修改 张天鹏 男 工程师 国有南阳市黄石庵林场 资料整理，试验设计修改 高萨娜 女 助理工程师 河南伏牛山国家级自然保护区黄石庵管理局 标准文稿修改 组培育苗试验 王 冰 女 硕士研究生 南阳师范学院 外业调查，组培育苗试验 裴新苗 女 技 师 新安县林站 数据整理 郭利华 男 高级工程师 河南省林业调查规 划站 培养基配置试验 常 玮 男 博士研究生 南阳师范学院 组织培养试验 焦铸锦 男 博士研究生 南阳师范学院 组织培养试验 董江伟 男 助理工程师 国有南阳市黄石庵林场 授粉、培育管理 乔世锴 男 工程师 /场长助理 国有南阳市黄石庵林场 资料收集
4、整理 王 玲 女 助理工程师 国有南阳市黄石庵林场 试验观测记录 王 君 女 助理工程师 国有南阳市黄石庵林场 资料整理观测试验 薛建敏 男 技 师 国有南阳市黄石庵林场 培育管理 薛 冰 女 技术员 国有南阳市黄石庵林场 培育管理试验观 测 二、制定标准的必要性和意义 曲 茎 石 斛 (Dendrobium flexicaule Z.H.TSi,S.C.Sun et L.G.XU)，兰科石斛属多年生草本植物，附生，我国特产 ,1986年我国发现的新种。茎圆柱形平卧或斜展，显著性迴折弯曲，人字形分蘖，伏牛山产的曲茎石斛，茎长 4 11(-15)cm,叶 2 4 枚互生于茎的上部，总状花序，单花
5、或双花，具 1 2 朵生于无叶茎的上部，花冠黄绿色，展开后粉白色，花瓣长 2.5 2.8cm,中宽1.3cm,唇瓣具紫色斑块。花期 5 月，蒴果，果期 9 10 月。生于伏牛山海 拔 800 1200m的阴坡、半阴坡山谷，溪流的岩石上。伏牛山野生曲茎石斛在民间深受群众所喜爱。 3 伏牛山产的曲茎石斛为河南省重点保护野生植物，道地名贵珍稀濒危中草药材，具有抗肿瘤、活血化瘀、清热生津、提高心脑血管功能、治疗消化系统疾病和眼科疾病、抗菌、抗血压、抗衰老和提高免疫力等功能作用，品质优良，黏度大，口感好，药用观赏价值高，鲜品市场价 2.0 3.0 万元 /500g，且供不应求。由于伏牛山产的曲茎石斛 (
6、又名小曲茎石斛），自然生境狭窄，人为采挖严重，目前已处于极度的濒危灭绝之中，种子自然繁殖十分困难。为了保护 和发展利用伏牛山曲茎石斛种质资源，扩大种群数量，保护其野生资源，石斛种子培养育苗是其繁殖的重要途径之一，但曲茎石斛种子规范培养繁育在我省还是空白，因此，制定一套曲茎石斛种子培养育苗生产技术规程很有必要。 三、主要起草过程 标准起草组通过多年对曲茎石斛种子培养育苗的实验研究，总结了一套完整的曲茎石斛种子培养育苗生产技术。本标准的编制工作从 2016年 3 月开始由南阳市黄石庵林场、河南伏牛山国家级自然保护区黄石庵管理局承担。在拟定标准编制工作进度后，进行课题调研，收集了国内外相关标准及石斛
7、育苗生产技术资料，进行总结 分析整理，通过近两年来的观察实验和分析总结整理，于 2017年 12月起草完成了曲茎石斛培养基播种育苗技术规程草稿，组织有关专业技术人员进行讨论修改 5 次，完成了征求意见稿及编制说明。 2018 年 7 月发放征求意见函共计 16 份，根据收集的专家修改意见，使之重新整理形成最后文稿。 4 四、制定标准的原则和依据 本标准根据 GB/T1.1-2009 给出的规则起草。依据我国我省发展曲茎石斛种植产业的需求和曲茎石斛种子培养育苗生产技术的实际状况，本着生产上适用，便于操作而制定的，是伏牛山曲茎石斛（又名叫小曲茎石斛）种子培养育 苗生产的技术标准。主要规定了伏牛山曲
8、茎石斛种子无菌培养育苗及大棚床苗培育生产的技术措施，有利于曲茎石斛种植推广和利用。本标准符合现行法律法规要求，是目前河南省伏牛山曲茎石斛种子培养育苗生产的第一个地方标准。 五、主要条款的说明 1、 4.1 制种母株选择 选择原产伏牛山区株型健壮、无病虫害、有效成分含量高，病经过鉴定的曲茎石斛作为制种母株。 2、 4.3.3.4 授粉 当采集到的父本花粉块，用沾有柱头黏液的牙签或镊子（夹起）轻轻转移放在已去除花粉块的母本合蕊柱下部凹陷的柱头上（蕊腔内），轻轻压紧或用牙签 将蕊柱腔的黏液全部粘上花粉块。动作一定要轻，以免刺伤花朵。授粉时气温不能超过 30，以 28左右为佳，湿度在 80% 85%为
9、佳。授粉最好在异株（丛）异花中进行。若不同株花期不同，可将开花的花粉块置洁净的培养皿中，放冰箱冷藏室保存，同时将镊子尖或牙签沾点冷开水即可沾住花粉块进行授粉。 5 3、 6.1 蒴果清洗与消毒 将经过后熟未开裂的蒴果，放在流水中洗去表面的灰尘杂质，并用牙刷蘸取浓度为 10%体积分数的洗洁精溶液刷洗果实表面，在浓度为 10%体积份数溶液中浸泡 20min，然后用流水冲洗 1h。在超净工作台上用 75%的酒精浸泡 30s，无菌水清洗干净，再放入0.1%的升汞溶液中浸泡 10min 后，用无菌水冲洗 5 6 次。 4、 6.3.1 播种 用 75%的酒精擦拭装有种子的玻璃瓶表面置于超净工作台上，用无
10、菌镊子均匀撒布于种子无菌萌发诱导培养基（参见附录 A 的A1）上。在 650ml的培养瓶（瓶的高度 14cm,直径 9.5cm,口径 5.2cm,每瓶灌装培养基量为 120ml）中进行固体培养。 5、 6.4.1 转接培养 播种培养 60 75d后，将原球茎均匀地转接到 650ml 培养瓶中的原球茎增殖继代培养基上进行继代固体培养。每瓶培养基 基量为 120ml，每瓶接种量为 40 株。 6、 6.5.1 转接培养 继代培养 45 60d 后，将原球茎均匀转接到 650ml 培养瓶中的丛生芽分化培养基上，进行固体培养。每瓶培养基量和接种量同 6.4.1。 7、 6.6.1 转接培养 丛生芽分化
11、培养 60 70d后，将茎株高 1cm以上的无根苗挑出，转接到 650ml培养瓶中的壮苗与生根培养基上进行固体培养。每瓶6 培养基量和接种量同 6.4.1。经过 50d的培育，瓶苗全部生根，生根数多在 3 4条，当幼苗生根后，可继续培养 70 120d即可出瓶炼苗。 8、 7.1 大棚选址与 构建 大棚设施应选在通风排水良好，水源丰富，交通方便无污染的开阔地段建造，大棚为镀锌钢管拱棚结构，宽度 8m，长度 3060m，高度 3.6m，南北向设置，棚顶覆盖无滴薄膜（或不覆盖薄膜），拱棚架上边覆盖遮阳率为 80%的黑色尼龙网，棚下部四周设防虫网，固定防风倒。 9、 7.3 苗床构建 每个栽植床为角
12、铁焊制，涂上防锈漆，苗床规格为长 3.0m，宽 1.2m，高 0.5m，床四周用高 10cm的塑料挡板做床围栏，下铺钢网，上铺塑料网，棚内栽植床分四行摆放。 10、 7.4 苗床基料准备与消毒 苗床栽培基质为松树皮 .首先 对松树皮栽培基质用水浸泡后，采用蒸汽杀菌的消毒方法处理基质材料，基质蒸煮温度为95 105 ，处理时间 100h 120h，基料上床厚度为 7 8cm，大料放下层，小料放上层。基质材料规格为大块长 2 3cm，小块长 0.5 1.0cm，大块占 80%，小块占 20%。 11、 7.5.1 炼苗 石斛组培瓶苗在组培室内降温处理 7d，然后转移种植大棚内，闭瓶炼苗 3-4d，
13、逐步打开瓶盖，先小后大，先拧松 1d左右，第 2-3d7 逐步揭开瓶盖，使其炼苗 10-15d左右，在炼苗期间若发现有感染瓶苗时，要用多菌灵 800倍液及时清洗消毒 ，全苗消毒 5 10min后及时种植。 12、 7.5.2.1 冲洗 打开瓶盖后的组培苗瓶中加入 60%的清水，然后将培养基摇散倒出，用流动的清水将培养基洗净，清洗中做到轻拿轻放，不要造成人为对瓶中小苗的损伤。 13、 7.5.2.2 瓶苗分级 将清洗干净的石斛瓶苗进行分级（分为 I、级苗，应符合附录 B 的要求），清除不合格的苗（无根苗、弱苗、病苗、损伤苗）。 14、 7.5.2.4 种植 栽植曲茎石斛组培苗时间以 4-5月为宜
14、。曲茎石斛为丛生性植物，每床栽 29 行，每行 11 丛，每丛 5-7 株。栽植方法是把栽培 基质扒个小穴，将根系经过甲基托布津 800 1000 倍液或多菌灵 800 倍液消毒过的石斛苗放入栽植穴内，将根系展开，不要伤及小苗，大小苗混栽为宜，不窝根，随即用扒起的基质料覆盖根系至根际处，然后再用小料覆盖小苗的根际处，栽后用手将每丛向上轻提一下，并使根系全部展开，同时把石斛小苗根颈处的基质小料扒开一点，使石斛根及茎基部处与基料表面能接触，根际部稍裸露在外为宜，并薄薄撒小料一层，以利从石斛苗茎基部萌发新的幼苗，扩大分蘖繁殖数量，栽后及时浇一次定植水，以浇8 透为原则。 15、 7.6.1 温度控制
15、 在生长季节， 棚内温度控制在 10 30之间，夏天温度高于 30时采取浇水及通风降温，冬天低于 0时关闭大门或大棚顶覆盖薄膜保温，大棚自然温度即可越冬和防止霜冻。伏牛山曲茎石斛在大棚内能耐极限最低温度 -13，极限最高温度 43。 16、 7.6.2 湿度控制 棚内空气相对湿度在 60% 70%，定植后的 7d内大棚保持密闭。幼苗叶片较干时应进行浇第二次定植水。以后床面见干时进行喷雾浇水，并逐渐打开通风，夏天高温季节湿度达到 70% 80%，并保持通风。 17、 7.6.4.1 水分管理 a）水质要求。以 PH 值为 6.5 左右 ， EC 值（可溶性盐的浓度）低于 0.75ms/cm 的软
16、水为佳。一般山泉水、河水、地下水、自来水和自然雨水都可以使用。 b）分阶段浇水。曲茎石斛苗床栽植后，前 2 个月内基质以保持潮润（手摸基质有润的感觉，但基质颜色不发白）状态为主，浇水原则是宁干勿湿，即床面基质不能过湿，也不能过干，床面见干时应及时喷雾水。栽植 2 个月后，曲茎石斛苗开始生长萌发新茎，长出新根系，这时需水量较大，以保持湿润（手摸基质有明显湿的感觉，但基质挤不出水）的状态为主。掌握浇水的原则是不干不浇，浇则浇透，不能浇 “吊脚水”（即基质只湿透表层9 2 3cm，下层全是干的），当表面基质发白，手摸感到燥，扒开基质 2 3cm 也较干时则表明缺水，这时应及时浇水。一般夏季 23d
17、浇一次透水，春秋季以 7 10d 浇一次透水，冬季以 10 12d浇一次透水。当棚内空气相对湿度低于 30% 40%时应及时补水。在生长季节基质应较湿润，生长停滞期，基质以略干为宜。切忌积水烂根。 c）每天浇水时间。遵循的原则是浇水后叶面不能有水珠过夜，即叶表面必须干燥过夜，否则叶片易染病腐烂。因此，浇水时间宜为上午 9 10点，下午 5 6点。即夏季秋节日落前后浇，冬春季节日出前后浇。夏天浇水时， 应尽量选择在早晨或傍晚进行，切不可在中午高温时浇水。 18、 7.4.4.2 施肥 a）肥料种类。一般来说，果蔬和兰花专用叶面肥都可以在曲茎石斛上应用。如“花多多”高氮肥，“花多多”平衡肥，氮磷二
18、氢钾、百泉含鳌态营养水溶肥和沼液等。栽植第一年施肥应以“花多多”肥为主。 b）施肥浓度。曲茎石斛叶膜质，对肥料浓度十分敏感。肥料使用最大浓度不超过 0.1%，一般气温 30以下的阴天施肥浓度为 0.1%。气温超过 30的晴天施肥浓度为 0.05%。通过发酵灭菌处理过的沼液使用浓度为 50 70 倍液喷施。 c）施肥时间与次 数。栽植后的第一个月内勿施肥。曲茎石斛施肥可结合抗旱浇水进行。一般上午 9 10 点，下午 5 6点为10 宜。曲茎石斛生长高峰期为 4 9月，此时每月施肥 2次，以施叶面肥为主。 19、 7.6.5 除草除杂 及时清除大棚内的杂草杂物和床面上的杂菌，以免滋生虫害和成为病菌
19、传播之处。 20、 7.6.6 苗期病虫害防治 苗期主要病虫害防治参见附录 C;苗期主要虫害防治参见附录 D。 21、 8.2 出床苗要求 出床苗的质量应符合附录 E 规定。 六、与国家法律法规和强制性标准的关系 该标准与国家法律法规和强制性标准相互协 调、没有冲突。 七、贯彻标准的措施建议 本标准批准发布后，建议全省在伏牛山曲茎石斛种子培养育苗生产或推广栽培中认真执行该标准，促进曲茎石斛种子培养育苗生产和栽培应用的规范化、标准化，减少曲茎石斛种苗繁育期间的经济损失，发挥曲茎石斛药用、观赏的多种效果。同时在应用中进一步开展相关技术研究，不断完善曲茎石斛种子培养育苗生产的熟化技术，为以后标准的修订提供技术依据。 曲茎石斛培养基播种育苗技术规程地方标准起草组 二一八年十一月二十日
