1、,高灵敏度病毒载量检测在肝炎诊疗中的意义张忠新,HBV 感染是全球性卫生问题,33% 的人在一生中会感染HBV;成年感染者中5%-10%会转为慢性乙肝, 全球约有3.5亿慢性HBV感染者; 每年,有100万人死于与乙型肝炎相关的肝硬化或者肝癌;= 每30s 夺走一个生命 感染率最高的区域在亚洲,非洲.,Lavanchy. J Viral Hepat 2004; World Health Organization, 2008; Elgouhari, Cleve Clin J Med 2008,不同的标志物提供不同的诊断以及治疗监控的信息,Modified from Pawlotsky et al
2、. Gastroenterol 2008,慢性乙型肝炎,干扰素或口服核苷（酸）类似物,口服核苷（酸）类似物或干扰素,观察，如ALT升高，或肝组织炎症坏死G2,或纤维化S2,无肝硬化,有肝硬化,HBeAg+HBV DNA20000 IU/mL,HBeAg-HBV DNA2000 IU/mL,ALT2ULN,ALT2ULN,ALT2ULN,失代偿期,代偿期,HBeAg+HBV DNA2000 IU/mL,HBeAg-HBV DNA200 IU/mL,HBV DNA可检测到,口服核苷（酸）类似物,中国慢性乙型肝炎防治指南（2010版）,高灵敏度HBV DNA检测能更准确判断治疗起点,启动治疗,200
3、0 IU/mL不充分应答,60-2000 IU/mL部分应答,Week 12: 鉴别原发性无应答,Week 24: 疗效早期预测,Keeffe et al Clin Gastroenterol Hepatol 2007,高灵敏度HBV DNA检测能更准确判断应答情况,QL=检测下限 (聚合酶链反应 (PCR)-检测不到 300 copies/mL 用 COBAS Amplicor) 从锁定数据库来的初步数据,Di Bisceglie et al. 2006,24周HBV DNA, copies/mL,2 年时PCR阴性（%）,高精准HBV DNA检测能更准确预测远期疗效,高灵敏度HBV DNA
4、检测比普通试剂能更准确判定病毒学突破,HBV DNA (log10 IU/mL),5.0,4.0,3.0,2.0,1.0,6.0,病毒学突破,Antiviral drug,Months,6,0,12,18,16,普通试剂,COBAS Taqman,检测灵敏度,南方医院用67例治疗前为HBV DNA强阳性样本，治疗24周后采用cobas TaqMan HBV检测与普通检测试剂结果对比,67例患者: HBeAg(+)，ALT2ULN，HBV DNA 6.0 log10 IU/mL-治疗前用cobas检测结果为7.900.73 log10 IU/mL-治疗前用普通试剂检测结果为7.110.44 lo
5、g10 IU/mL,普通PCR法 “假阴性”率高达44% (26/59),cobas高灵敏度HBV DNA检测能更准确判断治疗终点，有效防漏检（实例1）,COBAS HBV,430例血浆Realtime PCRHBV20 IU/mL,208/430(48.4%) 1000 copies/mL,Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan HBV病毒载量系统对慢性乙型肝炎抗病毒治疗监测的意义李敏伟 沃健儿 倪淑君 王 静 李兰娟浙江大学附属第一医院传染病诊治国家重点实验室Data on file,cobas高灵敏度HBV DNA检测能更准确判断治疗终点，有效防漏检（实例 2）,高灵敏
6、度HBV DNA检测的意义,更准确判断治疗起点更准确判断应答情况更准确预测远期疗效更早发现病毒学突破更准确预测耐药发生更准确判断治疗终点,正确的临床决策,全球有2亿人感染HCV流行率2.23.0%131.7亿慢性携带者2HCV相关的肝脏疾病每年夺取超过25万人的生命 180% 的感染者没有任何的临床症状5,64085% 的感染着未得到诊断712,HCV临床背景,1Chevaliez. Clin Microbiol Infect 2011; 2WHO 2003; 3Lavanchy. Liver Int 2009; 4Wiessing et al. Eurosurveillance 2008;
7、5Hoofnagle. Hepatology 2002; 6Lemon et al. Fields Virology 2007; 7http:/ 8Schlosser et al. EASL 2009; 9Vermehren et al. DGVS 2010; 10Gane. New Zealand Doctor 2007; 11Wild. Gastroenterology and Endoscopy News 2010; 12http:/www.hepatitiscmsg.org/hep-c-facts-stats.html.,国际指南明确提出高检测灵敏度要求,HCV RNA检测应使用高灵敏
8、度的试剂（最低检出限15 IU/mL）,APASL指南,“治疗HCV感染的期望临床终点是清除病毒，即采用最敏感的方法也无法检测到血清HCV病毒RNA，因此实验室内部检测应采用real-time PCR的方法对病毒进行检测”,持续病毒学应答(SVR),无应答,基线,治疗,复发,部分应答,UndetectableHCV RNA,HCV RNA,反弹,HCV RNA 检测限,疗效判定时间点,高灵敏度HCV RNA检测能更有效执行RGT策略,RVR (Rapid Virus Response ,快速病毒学应答), EVR (Early Virus Response ,早期病毒学应答)DVR (Dela
9、yed Virus Response, 延迟病毒学应答), NR (Null Response无应答), PR (Partial Response,部分应答),cobas高灵敏度HCV RNA检测更准确判断应答模式,中国基因1型患者RGT治疗方案基于中国现有平台检测（不全是高灵敏度HCV RNA检测）,HCV RNA 阴性,HCV RNA 阳性,HCV RNA 阴性,HCV RNA 阳性 (2 log10),Peg-IFN/RBV治疗48周,Peg-IFN/RBV治疗48周,停止治疗,基线,Wk 4,Wk 12,Wk 24,HCV RNA 阳性,Peg-IFN/RBV治疗72周,HCV RNA
10、 阴性,HCV RNA 阳性 (2 log10) 此后阴性,停止治疗,基线,Wk 4,Wk 12,Peg-IFN/RBV for 48 weeks,HCV RNA 阳性 (2 log10 (IU/mL),72周 (SVR),终止治疗,复发,由于pEVR被误判为cEVR，未延长疗程，导致出现所谓的“复发”,Cobas Taqman检测下限 (15 IU/mL),普通试剂检测下限 (1000 IU/mL),cobas,普通检测,魏来、陈新月等 ，传染病信息 2012年第25卷第3期,223例HCV患者,非RVR 33.63%(75/223),RVR 66.37%(148/223),4周,阳性 62
11、.67%（47/75）,假阴性 37.33%（28/75）,cobas,cEVR 89.24%(199/223),非cEVR 89.24%(24/223),普通检测,阳性 79.17%（19/24）,假阴性 20.83%（5/24）,高灵敏度HCV RNA检测指导正确的临床决策灵敏度较差的检测可能导致不正确的治疗决策,普通检测试剂可能导致不当的缩短疗程，增加复发可能,12周,cobas高灵敏度HCV RNA检测的意义,更有效执行RGT策略更准确判断应答模式有效防止pEVR与cEVR的误判，正确指导用药,正确的临床决策,罗氏cobas TaqMan病毒载量检测系统,+,全自动病毒载量平台, sa
12、mple-in, result-out 专利的内部标准品定量，保障结果的准确度和精密度流程灵活方便：试剂即拿即用，实验中随时添加样本、试剂及耗材实验条码自动扫描设计,方便实验记录及追踪有效避免污染,罗氏cobas TaqMan病毒载量卓越的检测性能,1.2 x 108 IU/mL HBV,NC,LPC,HPC,-,+,-,-,+,-,阴性质控品,低浓度阳性质控品,高浓度阳性质控品,正常人血浆,SK24Rack 1,NC,LPC,HPC,+,-,+,+,-,+,SK24Rack 2,NC,LPC,HPC,-,+,-,-,+,-,SK24Rack 3,NC,LPC,HPC,+,-,+,+,-,+,
13、SK24Rack 4,每批4架重复检测5批,样本棋盘放置研究显示零交叉污染,*Roche Internal Studies Data on File,罗氏cobas TaqMan 病毒载量有效防交叉污染,WHO 标准品,Li J., et al. (2011). Poster presentation at the Asian Pacific Association for the Study of the Liver Annual Meeting.,Mean log difference,COBAS Taqman HBV DNA 普通试剂 1普通试剂 2,病毒学应答,治疗起始浓度,Expec
14、ted level (IU/mL),多中心评估: WHO标准品溯源性对比,正确的临床决策需要可靠的实验室结果,只有cobas TaqMan 全部结果符合溯源性要求,Genotype C,Genotype B,Li J., et al. (2011). Poster presentation at the Asian Pacific Association for the Study of the Liver Annual Meeting.,Mean log difference,COBAS Taqman HBV DNA 普通试剂1普通试剂2,Virologicresponse NAs,Decision to treat,Virologicresponse NAs,Decision to treat,Expected level (IU/mL),Expected level (IU/mL),只有cobas TaqMan HBV全部结果符合准确性要求,多中心评估: 检测灵敏度及准确性对比,谢谢！祝工作顺利，身体健康！,
