AXON 700B 基本操作技术.docx

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资源描述

AXON 700B SOP一、准备:1、相关液体:大部分细胞外液的pH为7.4,电极内液的pH为7.2-7.3;培养细胞的缓冲体系为HEPES,而急性分离细胞或者组织切片的缓冲体系多为碳酸盐体系;至于渗透压,细胞内应高于细胞外(如340mOsmd: 330mOsmd)使细胞微肿胀从而利于封接。所有液体均应用微孔滤膜过滤,ICS应冻存;如果采用碳酸盐体系,那么实验过程必须灌流。2、电极:所用电极控制在2-5M,电阻值越大则tip越细,利于封接而不利于破膜,反之,电阻值越小则tip越粗,利于破膜而不利于封接(注意小细胞有时电极电阻也可大于5M);电极直径最好为5-10m,即对于400倍的显微镜下2-4mm;电极末端可用火烧平,防止刮掉氯化银。二、电压钳(主要是经典全细胞模式):(一)入水前1、液体:细胞外液应预热,早点拿出放置在室温下,取出细胞后用外液荡洗两遍,准确加入1-2ml外液(其中1ml最佳,可减少跨壁电容);填充细胞内液的高度以刚好没过银丝为佳,防止电极电阻增大,并用纸吸走残留在电极末端的液体,防止污染夹持器。将电极插入holde

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