1、 1 广西莪术不同炮制 对 姜黄素 成分 及 镇痛 抗炎 的影响 覃 葆 ， 谢金鲜 ， 杨海玲 ， 邓 欢，史勤怡 （广西中医学院药学院， 南宁 530001） 摘要 目的： 探讨 不同炮制方法对广西莪术姜黄素含量 及 镇痛 抗炎 作用 的影响。 方法： HPLC 测定广西莪术 生品、醋煮品、醋炙品 姜黄素 的 含量 ； 采用 小鼠 耳廓肿胀法、腹腔染料渗出法 研究其抗炎作用；采用热板 法、 扭体法观察 其 镇痛 作用 。 结果： 广西莪术 各 炮制品 姜黄素的含量为：生品醋炙品醋煮品 ；醋 制 炮制后具 有 较强的抗炎、镇痛 作用 。 结论： 不同炮制方法对广西莪术 质量 有一定 的影响
2、。 关键词 ： 广西莪术；炮制； 姜黄素 ； 抗炎、镇痛 ； 中图分类号 R283.6 文献标识码 A 文章编号 1005-9903（ 2011） 10- Effect of the Content of Curcumin and Anti- inflammation, Analgesic Effects on Different Processed Products of Curuma Kwangsiensis QIN Bao *, XIE Jin-xian, YANG Hai-ling, DENG Huan,SHI Qin-yi (Faculty of Pharmacy of GuangX
3、i Traditional Chinese Medical Univercity, Nanning 530001， China) Abstract Objective: To discuss the content of curcumin and the anti- inflammation, analgesic effects on different processed products of Curuma kwangsiensis. Method: The content of curcumin from different processed products of C. kwangs
4、iensis was determined by HPLC. The anti-inflammation effect was studied with mouse auricle swelling model induced by xylene and the model with reinforce permeability of abdominal cavity capillary caused by acetic acid in mice. The analgesic was conducted by twisting test and hot plate methods. Resul
5、t: The content of curcumin in different processed products of C. kwangsiensis was as follows: primitive vinegar-fried vinegar-cooked. Stronger inflammation and analgesic effects were found in the vinegar processed product. Conclusion: Different processed methods may have some affection to the qualit
6、y of C. kwangsiensis. Key words Curuma kwangsiensis ; processed; curcumin; inflammation; analgesic 广西莪术 是 2010年 版中国药典 収载的 蓬莪术、广西莪术 、 温郁金 3个品种之一， 是广西的地道药材。本草纲目 记载 ：“多以醋炒或煮熟入药，取其引入血分也。” 传统认为醋制可增强活血化瘀止痛功效， 现代炮制方法主要以醋煮、醋炙为主 。 广西莪术炮制前后均有较强的抗菌作用 1。 挥发油及 姜黄素是莪术镇痛抗炎的主要活性成分 2。本文比较不同炮制方法对广西莪术姜黄素成分的影响及 采用小鼠耳廓肿
7、胀法、腹腔染料渗出法研究其抗炎作用；采用热板法、扭体法观察其镇痛作用。 探讨 不同 炮制 方法 对广西莪术 质量 的影响 。 收稿日期： 20101227（ 002） 基金项目：广西科学研究与技术开发计划项目（桂科攻 0718002-4-3） 作者简介：覃葆，副教授，从事中药炮制研究 ， E-mail： 2 1 材料 广西 莪术采自广西灵山县，经广西中医学院韦松基教授鉴定，为姜科植物广西莪术 (Curcuma kwangsiensis) 的根茎。 昆明种小白鼠，由广西中医学院实验动物中心提供，使用许可证号 SYXK2003-0001。 姜黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号 110823
8、 200603）。 醋酸 地塞米松 （ 江苏东台市制药厂生产，批号 070823）， 罗通定注射液 （ 广东博罗先锋药业集团有限公司生产，批号 20071009)。 甲醇（色谱纯，天津四友生物医学技术有限公司，批号 041230101），乙腈（色谱纯， Fisher lawn，批号 07410）。LC-20AT型高效液相色谱仪 ,包括二元泵 ,高压梯度 UV检测 系 统 ,Shimadzu-LCSOlution化学工作站，赛多利斯 BP211D电子天 平 ， Aeu-210型电子天平 。 2 方法与结果 2.1 广西 莪术 炮制品制备 原产地加工方法为取鲜品 大小分档 ，洗净，水浸润透， 煮至
9、透心，晒干。 2.1.1 生品 取原药材 ,大小分档，洗净，水浸润透，切薄片，干燥，筛去碎屑作为生品（饮片）。粉碎过 60目筛备用。 2.1.2 醋煮品 取原药材置煮制容器内 ,加米醋及 3倍量 水浸没 ,用文火煮至醋汁被吸尽 ,内无白心时 ,取出 ,稍晾 ,切薄片 ,干燥。 粉碎过 60目筛备用。 莪术每 100 kg ,用米醋 20 kg。 2.1.3 醋炙品 取生品（饮片） ,加定量米醋拌匀 ,稍闷润 ,待醋被吸尽后 ,置炒制容器内 ,用文火加热 ,炒至微黄色 ,略带焦斑时 ,取出 ,放凉。 粉碎 及辅料用量同上 。 2 2 姜黄素 的 含 量 测定 2.2.1 色谱条件 SHIMADZ
10、U VP-ODS C18柱 (4.6 mm 150 mm,5 m )， 流动相乙腈 -0.1%冰醋酸 (45 55)，流速 1.0 mL.min- 1， 紫外检测波长 420 nm， 柱温 40 ， 进样量 20 L 。 2.2.2 对照品溶液的制备 取姜黄素对照品 适量， 精密称 定， 加 甲醇 制成 0.16 g L- 1姜黄素 对照 品溶 液。 2.2.3 供试品 溶液的制备 分别精密称取样品 2.5 g， 精密加入甲醇 100 mL , 索氏回流提 取 1 h，残渣再精密加入甲醇 100 mL , 索氏回流提取 1 h，合并滤液，减压回收甲醇，再用甲醇定容至 5 mL，离心冷藏备用。
11、2.2.4 线性关系 的考察 分别精密吸取姜黄素对照品溶液 1,2,3,4,5 L，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积 Y 对姜黄素对照品进样量 X(g)进行线性回归，得回归方程 :Y= 3363435 X + 2858.8（ r = 0.999 7） ，姜黄素在 0.016 0.08 g L- 1线性关系良好 。 2.2.5 精密度试验 精密 吸取姜黄素对照品溶液 5 L，连续 进样 6次， 姜黄素 峰面积 RSD 0.086%。 2.2.6 重 复 性试验 按上述样品溶液制备方法及色谱条件，对同一样品（醋煮 品 ）平行 试验 6份， RSD 1.71%，表明方法重 复 性 良好 。 2.2
12、.7 稳定性试验 精密吸取醋煮品溶液 20 L， 分别在 0， 2， 4， 6， 8， 10 h按上述色谱条件 测定峰面积，结果 RSD 1.77% ,表明 供试 品 溶液至少在 10 h内稳定。 2.2.8 加样 回收率试验 精密 称取 已知 含量的同一批样品（生品） 1.25 g，采用加样回收试验，加入 等量 姜黄素对照品。按供试品溶液的制备 样 品 ，按 2.2.1项下 条件测定， 平行 6份， 计算回收率 99.97 ， RSD 3 0.03%。 2.2.9 样品含量测定 按 2.3项下制备供试品溶液， 分别吸取各 样 品 20 L， 在上述色谱条件下测定 ， 结果 生品 、 醋煮品
13、、 醋炙品 姜黄素 的质量分数分别为 0.0280， 0.0180， 0.0204 mg g-1（ n=3） ,生品明显高于其他炮制品，醋炙品与醋煮品之间相差不大。 D C B A t/min 图 1 广西莪术 各炮制品 姜黄素 HPLC A.对照品 ； B. 醋煮品 ； C. 生品 ； D.醋炙品 ； 1.姜黄素 2.3 广西莪术各 炮制品 抗炎 作用 2.3.1 样品制备 炮制品 饮片 各取 1000 g， 用水浸润 30 min，加水煎煮 3次， 每次 30 min， 过滤，滤液浓缩至 500 mL，每 1 mL浓缩液含 2 g药材 (2 g药材 /mL)。 2.3.2 广西莪术不同炮制
14、品对二甲苯诱发小鼠耳廓肿胀的影响 ： 按朱氏改进法，取昆明种小白鼠 60只，随机 分为 5组，每组 12只。即空白对照组 (NS)， 阳性对照组 (地塞米松 )， 莪术 3种不同炮制品组。给药容量为 20 mL kg-1，对照组给同等容量的生理盐水，灌胃给药 (i.g)，每天 1次，连续 8 d。每隔 2 d称重 1次，根据体重调整给药剂量 。末次给药后 60 min于小鼠右耳廓滴二甲苯溶液 0.05 mL致炎。 15 min后脱颈 椎处死动物，沿耳根部剪下两耳，用 6 mm打孔器在两耳同部位等面积打下耳片，称重。计算小鼠耳片增重，作为肿胀度，计算抑制率。 各用药组与对照组比较，进行组间 t检
15、验。 结果显示， 醋煮品对二甲苯所致的 小鼠 耳廓肿胀有明显的抑制作用 ， 二甲苯诱发耳廓肿胀 度与 空白对照组 比较 有 显著性差异 (P0.01)，抑制率 (%)为 74.1。 见表 1， 2。 表 1 广西 莪术不同炮制品对二甲苯诱发小鼠耳廓肿胀的影响 (X S ) 组别 n 剂量 / g kg- 1 耳廓肿胀度 /mg 抑制率 /% 空白 对照 11 - 5 . 8 6 4 . 2 9 - 地塞米松 12 0 . 0 0 45 2 . 1 5 1 . 5 8 * 6 3 . 3 生 品 9 20 2 . 9 4 1 . 6 1 4 9 . 8 醋炙品 11 20 3 . 1 2 1 .
16、 8 8 4 6 . 8 醋煮品 12 20 1 . 4 8 1 . 4 3 * 7 4 . 8 注：与 空白对照组 比较 *P0.05， *P0.01；表 2-5同。 4 表 3 广西 莪术不同炮制品对 二甲苯诱发 炎症小鼠 体重 的影响 ( ， n 12) 组别 剂量 / g kg- 1 给药前 /g 给药后 /g 2 d 4 d 6 d 8 d 空白对照 - 19.331.92 20.422.35 22.922.87 24.753.37 27.353.37 地塞米松 0.0045 19.502.32 18.832.25 19.832.29* 21.271.95* 23.222.51* 生
17、 品 20 19.331.92 20.502.15 22.672.71 24.172.89 27.123.66 醋炙品 20 19.422.11 20.331.92 23.581.62 24.922.56 26.862.56 醋煮品 20 19.002.04 20.173.01 21.173.76 24.097.42 28.484.39 2.3.3 广西莪术不同炮制品对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 (腹腔染料渗出法 ):按朱氏改进法，取昆明种小白鼠 60只， 按体重随机 分为 5组，每组 12只。即空白对照组 (NS) ；阳性对照组 (地塞米松 )； 广西 莪术 3种炮制品组。给药容量为 20
18、 mL kg-1，对照组给同等容量的生理盐水，灌胃给药 (i.g)，每天 1次，连续 7 d。末次给药后 60 min，各鼠尾静脉注射 0.5%伊 文思蓝溶液 5 mL kg-1体重，同时腹腔注射 (i.p)0.68%冰醋酸溶液 0.2 mL。 15 min后脱颈椎处死动物，各鼠腹腔注射 (ip)生理盐水 6 mL冲洗腹腔，收集腹腔液，离心(3000r min-1)10 min，用 722分光光度计 590 nm处测定吸收度 (OD值 )，各组 腹腔液 的 OD值分别与对照组比较，进行两组间 t检验。 结果显示，广西 莪术醋煮品、醋炙品对醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性增加有较好 的抑制作用
19、，各用药组的 腹腔 洗出液 OD值 分别与空白对照组比较有显著性差异 (P0.01或 P0.05)。 见表 4。 表 4 广西 莪术不同炮制品对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 (X S ) 组 别 n 剂量 / g kg- 1 腹腔洗出液 OD 值 (A) 空白 对照 11 - 0.203 0.113 地塞米松 12 0.0045 0.1180.050* 生 品 9 20 0.394 0.388 醋炙品 11 20 0.076 0.030* 醋煮品 12 20 0.111 0.035* 2.4 广西莪术各炮制品 镇痛 作用 2.4.1 广西 莪术不同炮制品对冰醋 酸致痛的影响 (扭体法 ):取昆
20、明种小鼠 50 只，体重 （ 202） g，雌雄不拘，随机分为 5 组，每组 10 只，即空白对照组 (NS)；阳性对照组 (罗 通定 40 mg kg- 1 )； 广西 莪术 3 种不同炮制品组。给药容量为 20 mL kg-1，剂量为 20 g kg-1，对照组给同等容量的生理盐水，灌胃给药 (i.g)，每天 1 次，连续 3 d。末次给药后 60 min，分别腹腔注射 (i.p)0.6冰醋酸 10 mL kg-1g，观察并记录给醋酸后 15 min 内扭体反应次数。各用药组与对照组的扭体反应均值进行 2 组间 t 检验，并计算镇痛率。 结 果sx5 显示， 醋煮品 、 醋炙品对 冰 醋酸
21、所致的 小鼠 扭体 反应 有明显的抑制作用 ， 15 min 内的小鼠 扭体 反应次数与空白对照组比较有显著性差异 (P0.05)。 镇痛率 分别 为醋煮品 60%， 醋炙品 52%。 见表 5。 表 5 广西 莪术不同炮制品对冰醋酸致痛的影响 (X S , n=10) 组 别 剂量 /g kg- 1 扭体反应次数 镇痛率 /% 空白 对照 - 12.10 9.24 - 罗通定 0.04 4.002.91* 66.9 生 品 20 14.7010.83 -21.4 醋 炙品 20 5.802.82* 52.1 醋煮品 20 4.803.01* 60.3 2.4.2 广西莪术不同炮制品对热板致痛
22、的影响 取 18 22g昆明种雌性小鼠，在室温 （ 231） 、热板温度恒定在 （ 550.5） 的条件下，将小鼠逐个置于自控温度热板仪上，测试各小鼠疼痛反应 (舔后足为指标 )，弃去反应过于敏感 (3S出现痛反应 )和反应过于迟钝 (30s内无痛反应 )的动物，连续 2次，取均值作为药前痛阈，根据痛阈值随机分为 5组，每组 10只。即空白对照组 (NS)；阳性对照组 (罗通定 40 mg kg- 1 )； 广西 莪术 三种 不同炮制品组 (剂量为 20 g/kg)，空白对照组给同等容量的生理盐水。给药容量为 20 mL kg- 1 ，灌胃给药 (i.g)，每天 1次，连续 3 d。末次给药后
23、于 30,60,90 min分别测定不同时间的痛阈值，记录痛阈值，计算器痛阈提高率。 结果显示， 热板 致痛 给药后 不同时 段 的痛阈 提高百分 率 也有所提高，其中生 品 给药后30 min痛阈 提高 率 为 98%，结果提 示广西 莪术 3种 炮制品 对 热板 致痛具有不同程度的镇痛作用 。 见表 6。 表 6 广西 莪术不同炮制品对小鼠热板致痛的影响 (X S , n=10) 3 讨论 广西莪术不同炮制品姜黄素的含量高低为：生品醋炙品醋煮品，生品明显高于其他炮制品 。 与朱善岚等 报道 3的 蓬莪术中姜黄素的含量高低为：醋制品酒制品炒制品生品 的结果 似乎 不一致。 罗红霞提出 4由于
24、姜黄素分子中含有多个双键、酚羟基及羰基等，故其化学反应较强。一些金属离子及强光、高温等可影响姜黄素的稳定性。 本研究 提示广西莪术用醋制等加热炮制对姜黄素等有效成分有一定影响。 组 别 剂量 /g kg- 1 给药前 痛阈 /s 给药后痛阈 /s (痛阈提高率 /%) 30 min 60 min 90 min 空白 对照 16.337.61 13.19 5.58 15.16.99 11.922.70 罗通定 0.04 17.205.00 45.5119.20* (245) 56.147.23* (272) 50.1012.49* (321) 生 品 20 19.086.41 26.1415.1
25、9* (98) 14.646.78(-3) 15.2910.85(28) 醋炙品 20 17.934.23 18.1713.02(38) 15.627.48(3) 14.505.43(22) 醋煮品 20 16.993.81 14.516.61(10) 16.8916.20(12) 12.646.67(6) 6 传统炮制理论认为醋制可增强活血化瘀止痛功效， 醋制的炮制方法最常用的是 醋炙 和 醋煮 ，但中国药典 2010年版仅收载 醋煮 炮制方法。 宋坤等报道 5 蓬莪术 不同炮制品均具有显著的镇痛抗炎作用， 其中醋煮品 作用较强。 本实验 结果也表明， 广西 莪术 不同 炮制品 也具有较显著
26、的镇痛抗炎作用，其中 醋煮品 作用较强。 挥发油及 姜黄素 都 是莪术镇痛抗炎的主要 有效 成分 ，本实验生品 姜黄素 含量较高但 醋煮等炮制品药效较好，其量效关系有待进一步探讨。 参考文献 1 覃葆，曾春晖，荣玲芝， 等 .不同炮制方法对广西莪术的质量研究 J.时 珍 国医国药， 2009， 20（ 9）：2247. 2 陆兔林 .中药莪术有效物质及饮片规范化研究 D.南京 :南京中医药大学， 2003:9. 3 朱善岚，黄品芳 . HPLC法测定莪术不同炮制品中姜黄素含量 J.海峡药学， 2007， 19（ 3）： 52. 4 罗红霞，方清茂，潘晓鸥 .姜黄素的提取及其含量测定研究进展 J.中国药业 ,2004,13（ 6）： 75. 5 宋 坤 ， 陆兔林 ， 李 林 . 莪术不同炮制品 镇痛抗炎作用研究 J.中医药学刊 ,2005,23（ 3）： 443. 责任编辑 仝燕
