1、July 15, 2011宝日医生物技术(北京)有限公司Clontech慢病毒相关技术介绍慢病毒相关技术介绍 27/15/2011 背景简介病毒载体基因传递 慢病毒载体容易转染物理方法非病毒载体 Clontech 慢病毒相关产品可以转染非分裂细 胞实现持久有效表达逆转录病毒载体腺病毒载体 慢病毒相关技术介绍 37/15/2011 内容介绍1提高慢病毒滴度的策略2提高转导效率的方法3Lenti-X慢病毒包装系统 1慢病毒相关技术介绍 47/15/2011 Lenti-X慢病毒包装系统慢病毒相关技术介绍 57/15/2011 背景简介慢病毒的应用生物 安全性病毒 包装滴度靶细胞 转导效率l 病毒包
2、装流程示意图慢病毒相关技术介绍 67/15/2011 第四代包装系统 Lenti-X HTXLenti-X HTX将 Gag-Pro和 RT-IN分离,降低产生具有复制能力病毒的几率,大大提高生物安全性。创新点I慢病毒相关技术介绍 77/15/2011 第四代包装系统 Lenti-X HTXLenti-X HTX引入 Tet-Off诱导表达系统, 大大提高病毒滴度! 创新点 II慢病毒相关技术介绍 87/15/2011 Lenti-X包装系统通过流式细胞仪测定:Lenti-X包装系统获得的病毒滴度高于 108 IFU/ml;只需 10 l 病毒上清即可转导大部分 HeLa细胞。Lenti-X慢
3、病毒相关技术介绍 97/15/2011 Clontech慢病毒系统的优点将 Gag和 Pol分离同时转染 5个载体才可以包装出具有感染性的病毒引入 Tet-Off技术包含改善载体性能和提高病毒滴度的WPRE、 RRE和 cPPT/CTS序列更高的生物安全性基于 VSV-G的病毒可应用于几乎所有类型细胞ECO 取代 VSV-G,只限于鼠类细胞更高的包装病毒滴度两种形式的病毒:泛嗜性和单嗜性慢病毒相关技术介绍 107/15/2011 慢病毒载体的种类cDNA载体 pLVX-PuroRNAi载体 pLVX-shRNA1pLVX-shRNA2ProteoTuner载体 pLVX-PTunerpLVX-Ptuner Green诱导表达载体pLVX-Tet-On AdvancedpLVX-Tet-Off AdvancedpLVX-Tight-Puro