大鼠甲1型流感病毒酶联免疫分析.DOC

上传人:天*** 文档编号:141888 上传时间:2018-07-10 格式:DOC 页数:2 大小:47.50KB
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资源描述

1、大鼠甲 1型流感病毒 酶联免疫 分析 试剂 盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 。 96T 使用目的: 本试剂盒用于测定 大鼠 血清 、 血浆及相关液体样本 中 甲 1 型流感病毒 表达 。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 大鼠甲 1 型流感病毒 表达 。用纯化的 大鼠甲 1 型流感病毒 抗体 包被微孔板,制成固相抗 体 , 可与样品中 甲 1 型流感病毒 相结合 , 经洗涤除去未结合的抗 原 和其他成分后 再与 HRP 标记的 甲 1 型流感病毒 抗体 结合,形成抗 体 -抗 原 -酶标抗体 复合物 ,经过彻底洗涤后 加 底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下

2、转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值) ,与 CUTOFF值相比较, 从而判定标本中 大鼠甲 1 型流感病毒 的存在与否 。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml 1 瓶 7 终止液 6ml 1 瓶 2 酶 标试剂 6ml 1 瓶 8 阳性对照 0.5ml 1 瓶 3 酶 标包被 板 12 孔 8 条 9 阴性对照 0.5ml 1 瓶 4 样品 稀释液 6ml 1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂 A 液 6ml 1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml 1/瓶 12 密封袋 1 个 标本 要求 1标本采集

3、后尽早进行 提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行 实验。 若不能马上进行试验,可 将标本放于 -20 保存,但 应 避免反复冻融 2不能检测含 NaN3 的样品 ,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的( HRP)活性。 操作步骤 1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔 、 阳性对照 2 孔、空白对照 1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 2. 加样: 分别在阴、阳 性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50l。然后在 待测样品孔 先加样品稀释液 40l,然后再加待测样品 10l。 加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻 晃动 混匀, 3. 温

4、育:用封板膜封板后置 37 温育 30 分钟 。 4. 配液: 将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜, 弃去液体, 甩干 ,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50l,空白孔除外 。 7. 温育:操作同 3。 8. 洗涤:操作同 5。 9. 显色:每孔先加入显色剂 A50l,再加入显色剂 B50l,轻轻震荡 混匀, 37 避光显色15 分钟 . 10. 终止: 每孔加终止 液 50l, 终止反应 (此时蓝色立转黄色) 。 11. 测定:以空白空调零, 450nm 波长依序测量各孔的 吸光 度(

5、OD 值) 。 测定应 在加终止液后 15 分钟以内进行 。 计算和结果判定: 试验有效性:阳性对照孔平均值 1.00; 阴性对照平均值 0.10 临界值( CUT OFF)计算:临界值 =阴性对照孔平均值 +0.15 阴性判定:样品 OD 值 临界值( CUT OFF)者为 大鼠甲 1 型流感病毒 阴性 阳性判定:样品 OD 值 临界值( CUT OFF)者为 大鼠甲 1 型流感 病毒 阳性 。 注意事项 1操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。 2试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 3 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出,稀释时可在水 浴中加温助溶 ,洗涤时不影响结果。 4 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 5底物请避光保存。 6试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为 630nm 7所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸,使用时必须注意安全。 保存 条件及有效期 1 试剂盒保存: ; 2-8 。 2有效期: 6 个月

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