RNA抽提与反转录步骤x.doc

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资源描述

RNA抽提步骤准备:DEPC水配制:1000ml双蒸水中加1mlDEPC,充分振荡使其溶解,放在1000ml容量瓶中静置过夜后备用。配成终浓度为0.1%,室温搅拌过夜,121高压20min,4密封保存。注:DEPC属于一种致癌物质,易挥发,要小心并在通风橱中操作,高压后就会分解,其毒力消失。(用来泡器械的不高压,用来配置试剂的话要高压)灭菌:匀浆器、手术器材(剪刀、镊子)铝箔包好,EP管、枪头(三种规格)、铝箔、纸 121 60 (120min)min;DEPC水 80 30min。其中手术器材用于提取组织RNA。(匀浆器180,120min)1. 加Trizon裂解细胞:加入适当量的Trizol至细胞中(直接加入去培养液平板中后用枪吸出,亦可细胞刮下后离心去上清再加,用量约1ml Trizol每3106、cells)。贴壁细胞在遗弃培养基后,可以直接加入Trizol(按10cm2 / 1ml Trizol的比例)裂解,匀浆一定要彻底。反复吹打以打碎细胞结块,室温放置5min,使其充分裂解。(注:此时可以-80长期保存)2. 4度,12000g

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