1、母乳中的 HAMLET对肿瘤和细菌的抑制六安人乳库2012年 3月HAMLET：人 -乳白蛋白分子部分展开后与油酸结合形成的复合物 HAMLET在体外能诱导各类癌细胞凋亡，包括肺癌、咽喉癌、肾癌、结肠癌、膀胱癌、前列腺癌和卵巢癌，以及黑色素瘤、脑胶质母细胞瘤和白血病。 但是对正常细胞没有任何毒性。 形成 HAMLET需要以下条件：在母乳喂养儿童的胃内，在低pH值环境中打开蛋白质分子释放出钙，以及对酸敏感的脂肪酶水解母乳中的甘油三酸酯释放出油酸。 摘自 HAMLET Kills Tumor Cells by Apoptosis Structure, Cellular Mechanisms, an
2、d Therapy The Journal of Nutrition 2005, 135: 12991303瑞典 兰德大学；挪威 Haukeland大学医院HAMLET的制备方法 提纯：人乳乳清液用硫酸铵沉淀，析出乳白蛋白，然后进行苯基 -琼脂糖和体积排阻层析（层析柱为琼脂糖 G-50），蛋白液的纯度通过 SDS-PAGE、琼脂糖凝胶电泳和光谱技术进行分析 脱钙：将 25mg提纯得到的 - 乳白蛋白溶于 1.8mM Tris-HCl溶液中，加入 3.5mM的 EDTA以移除 Ca离子，蛋白分子构象的变化通过近紫外光普和 ANS（ 8-苯胺基 -1-萘磺酸铵盐）荧光光谱检测 离子交换层析：将 1
3、0mg亚油酸溶于 0.5ml 99.5%的乙醇中，超声波处理 3分钟，之后加入 10ml 10mM Tris-HCl，注入用 DEAE-Trisacryl M（一种层析柱填料，法国 BioSepra公司）装填的层析柱（ 14 cm1.6 cm)，连接到生物逻辑层析系统（ BioRad公司）中，用 NaCl进行梯度洗脱（洗脱液 A： 10mM Tris-HCl， pH8.5；洗脱液 B：含有 1M NaCl的洗脱液 A）。蛋白洗脱液透析脱盐，至少更换 4次蒸馏水。最后将透析液冻干，得到 -乳白蛋白 摘自 Conversion of a-lactalbumin to a protein induc
4、ing apoptosis PNAS 2000, 97(8): 4221-4226瑞典兰德大学人乳对肺部癌细胞的抑制（体外）癌 细 胞存活率（染色法 1）癌 细 胞存活率（染色法 2）对 照 组 92 100人乳 1# 2 0人乳 2# 2 1人乳 3# 4 2牛乳 100 64人 - 乳白蛋白 92 80牛 - 乳白蛋白 93 82人溶菌 酶 87 69鸡 溶菌 酶 86 75人乳 铁 蛋白 98 人 MAL 0 0 摘自 Apoptosis induced by a human milk protein , Proc. Natl. Acad. Sci., 1995, 92: 8064-80
5、68瑞典 兰德大学；卡罗林斯卡学院MAL： 用离子交换柱处理过的多聚体 - 乳白蛋白可见：人乳及结合了钙离子的多聚体 - 乳白蛋白具有明显的抑制癌细胞生长的功能MDCK（一种肾癌细胞株）暴露于人乳中产生的凋亡（人乳 1:10稀释，24小时）A 对照样 B 实验样 人乳对肺部癌细胞的抑制（体外）HAMLET对皮肤乳头状瘤的抑制皮肤乳头状瘤是作为研究人体环境（ 0.9%NaCl）中HAMLET 功效的第一个模型。 摘自 HAMLET Kills Tumor Cells by Apoptosis: Structure, Cellular Mechanisms, and Therapy Journal
6、 of Nutrition. 2005, 135: 12991303 瑞典 兰德大学；挪威 Haukeland大学医院HAMLET对皮肤乳头状瘤的抑制 摘自 Treatment of skin papillomas with topical alpha-lactalbumin-oleic acid ， The New England journal of medicine 2004, 350(26): 2663-2672瑞典 兰德大学图中第 1列（ A、 D、 G）为 3位患者治疗前的病灶；图中第 2列（ B、 E、 H）为 3位患者接受 HAMLET治疗后 3周时的病灶；图中第 3列（ C、
7、 F、 I）为 3位患者接受 HAMLET治疗后 2年随访时的病灶。患者 1的病灶基本上完全消失；患者 2和 3则减少了75%。HAMLE对膀胱癌的抑制a图：采集 9个病人在滴注 HAMLET前的尿液和滴注后两小时的尿液，苏木紫和伊红检测肿瘤细胞数。发现进行HAMLET滴注后的病人尿液中肿瘤细胞数均显著高于滴注前。b图：分别滴注 -乳白蛋白，PBS ,NaCl，同样的方法对比滴注前后的尿液，滴注前后无明显差异。 摘自 Bladder cancers respond to intravesical instillation of (HAMLET human -lactalbumin made l
8、ethal to tumor cells) International Journal of Cancer 2007, 121: 1352-1359 瑞典兰德大学HAMLE对膀胱癌的抑制c图：台盼蓝染色经HAMLET滴注后的病人尿液， 镜检能发现存在有大量的死亡或凋亡细胞。 HAMLE对膀胱癌的抑制a图：第一排是 P2,P5,P9这三个人的滴注前的尿液离心后涂片，第二排是这三个人的滴注后的尿液离心后图片。都用苏木紫 -伊红和 TUNEL染色。TUNEL是能特异性的对凋亡细胞进行染色的试剂，在荧光显微镜下显示出荧光。从图片可以看出，滴注前病人的尿液里总细胞数量少，能被 TUNEL染色的细胞更少。而滴注了 HAMLET后的病人，尿液中会存在有大量的凋亡细胞。
