1、 1 人 干细胞生长因子 -（ SCGF-） 酶联免疫 分析（ ELISA） 试剂 盒 使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于 检测人 血清，血浆中 干细胞生长因子 -（ SCGF-） 水平，感染人 的血液学诊断。 本公司专业供应 Elisa试剂盒，品质保证，价格优惠，可免费提供代测服务，欢迎来电咨询： 15821579651，021-35300935 QQ:112549202 实验原理 ： 本试剂盒 采 用双抗 体 夹心 酶联免疫 法 （ ELISA） 测定 标本 中 人 干细胞生长因子 -（ SCGF-） 。用纯化的 人 干细胞生长因子 -（ SCGF-） 抗 体 包被微孔板，
2、制成固相抗 体 ， 可与样品中 干细胞生长因子 -（ SCGF-） 相结合 ， 经洗涤除去未结合的抗 体 和其他成分后 再与HRP 标记的 干细胞生长因子 -（ SCGF-） 抗 体 结合，形成抗 体 -抗 原 -酶标抗 体 复合物 ，经过彻底洗涤后 加 底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测 定吸光度（ OD 值） ，与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中 人 干细胞生长因子 -（ SCGF-） 的存在与否 。 试剂盒组成 ： 试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存 说明书 1 份 1 份 封
3、板膜 2 片（ 48） 2 片（ 96） 密封袋 1 个 1 个 酶标包被板 1 48 1 96 2-8保存 阴性对照 0.5ml 1 瓶 0.5ml 1 瓶 2-8保存 阳性对照 0.5ml 1 瓶 0.5ml 1 瓶 2-8保存 酶标试剂 3 ml 1 瓶 6 ml 1 瓶 2-8保存 样品稀释液 3 ml 1 瓶 6 ml 1 瓶 2-8保存 显色剂 A 液 3 ml 1 瓶 6 ml 1 瓶 2-8保存 显色剂 B 液 3 ml 1 瓶 6 ml 1 瓶 2-8保存 终止液 3ml 1 瓶 6ml 1 瓶 2-8保存 浓缩洗涤液 （ 20ml 20 倍） 1 瓶 （ 20ml 30 倍
4、） 1 瓶 2-8保存 样本处理及要求 ： 1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 /分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂， 混合 10-20 分钟后，离心2 20 分钟左右（ 2000-3000 转 /分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 /分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时
5、，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 /分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（ PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出 细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 /分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS， PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8的温度。加入一定量的 PBS（ PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 /分
6、）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 保存，但 应 避免反复冻融 . 7. 不能检测含 NaN3 的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。 操作步骤 ： 1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔 、 阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50l。然后在 待测样品孔 先加样品稀释液 40l，然后再加待测样品 10l。 加样将
7、样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀， 3. 温育：用封板膜封板后置 37 温育 30 分钟 。 4. 配液： 将 30（ 48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液 加蒸馏水至 600ml 后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜， 弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外 。 7. 温育：操作同 3。 8. 洗涤：操作同 5。 9. 显色：每孔先加入显色剂 A 50l，再加入显色剂 B 50l，轻轻震荡混匀， 37 避光显色15 分钟 10. 终止： 每孔加终止 液 50l， 终止反应 （此时
8、蓝色立转黄色） 。 11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的 吸光 度（ OD 值） 。 测定应 在加终止液后 15 分钟以内进行 。 结果判定： 试验有 效性：阳性对照孔平均值 1.00; 阴性对照平均值 0.10 临界值（ CUT OFF）计算：临界值 =阴性对照孔平均值 +0.15 阴性判定：样品 OD 值 临界值（ CUT OFF）者为 人 干细胞生长因子 -（ SCGF-）阴性 阳性判定：样品 OD 值 临界值（ CUT OFF）者为 人 干细胞生长因子 -（ SCGF-）阳性 注意事项 1操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。 3 2试剂盒从冷藏环
9、境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 3 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水 浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。 4 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 5底物请避光保存。 6试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm 7所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。 保存条件及有效期 1 试剂盒保存： ； 2-8 。 2有效期： 6 个月 上海逸峰生物科技有限公司代理不同品牌价格档次的 ELISA 试剂盒。数万种抗体产品等 , 品种多，质量好，灵敏度高，价格实惠，并且还提供免 费代检测服务。 本公司的更多产品，请点击公司网址： http:/ 订货电话： 021-35300935 15821579651 传真： 021-35300936 网 站： http:/ E-mail：
