1、 培养基验证文件制 药 有 限 公 司验证文件名称 验证文件编码计数培养基适用性检查验证方案 TS-YZ-2522-01制 药 有 限 公 司验证立项申请表验证立项题目 计数培养基适用性检查的验证 立项编号 TS-YZ-2522-01验证形式 验 证立 项 部 门 质量部 申请日期 年 月 日验 证 对 象 计数培养基适用性验证目的及验证内容需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基是否适合需氧菌、霉菌及酵母菌数测定。主管部门审核意见同意对计数培养基适用性检查试验方案进行验证。年 月 日对验证方案的编制及实施要求验
2、证方案编制应科学，合理，方法应切实可行，实施必须按照方案进行。验证总负责人批准经审核批准对计数培养基适用性检查进行验证。签字： 年 月 日验证方案的审批起草部门 签 名 日 期化验室质量部批准部门 签 名 日 期质量部验证总负责人验 证 方 案 目 录1、概述2、验证目的3、验证范围4、验证项目小组成员及职责5、验证合格标准6、试验材料7、菌液制备8、适用性检查9、验证记录10、验证结论及综合评价计数培养基适用性检查的验证方案1. 验证目的：需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基是否适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数
3、测定。2. 参照标准：中国药典2015 年版四部 1105 非无菌产品微生物限度检查法。3. 验证项目：胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基的适用性检查。4.验证小组人员及职责：人员组成 姓名 部门 职务/职称 职责组长 质量部 副部长负责验证期间各部门的协调及整个验证过程的具体实施。化验室 主任化验室 化验员负责验证方案的起草及具体实施，确保验证过程能按方案规定的程序进行，负责各种验证资料（检查结果）的整理，负责验证报告的编写。化验室 化验员负责验证方案的审核及批准；负责出具检验报告；审查验证报告及发放验证报告；负责验证文件的管理成员化验室 化验员负责验证报告的编写规范；审查验证报告及
4、发放验证报告。5. 合格标准：被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在 0.52 范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。6. 试验材料：6.1. 被验证产品：胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基。6.2. 仪器设备：6.2.1. YXQ-LS-100G 型立式压力蒸汽灭菌器6.2.2. GHT-00 双人净化工作台 6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安全柜6.2.4. MJ-250I 型霉菌培养箱 (2025)6.2.5. LRH-250 生化培养箱 (3035)6.2.6. 电热恒温干燥箱6.2.7 微波炉6.3. 验证用培养基 名称 生
5、产厂家 批号6.4. 验证用菌株：(第 代)7. 菌液制备 按 6.4 规定程序培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用 pH7.0 无菌氯化钠 -蛋白胨缓冲液制成约为50100cfuml 的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入 35ml 含 0.05%（ml/ml）聚山梨酯 80 的 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05%（ml/ml）聚山梨酯 80 的 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为 50100cfuml 的黑曲霉孢子悬液。验证菌株 培养基 培养温度 培养时间
6、（小时）8. 适用性检查： 8.1. 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，每株试验菌平行制备 2 个平皿，分别注入 2 个无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，并作阴性对照，混匀，凝固，置 3035培养 24 小时，计数；取白色念珠菌的菌液（50100cfu/ml）各 1ml，分别注入 2 个无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，并作阴性对照，混匀，凝固，置 2025培养 72 小时，计数；取黑曲霉菌的菌液（50100cfu/ml）1ml，注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿，并作阴性对照，混匀，
7、凝固，置 2025培养 168 小时，计数。8.2. 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿，并作阴性对照，混匀，凝固，置 3035培养 24 小时，计数；取白色念珠菌的菌液（50100cfu/ml）各 1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿，并作阴性对照，混匀，凝固，置2025培养 72 小时，计数；取黑曲霉菌的菌液（50100cfu/ml）各 1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂对照培养基，每
8、株试验菌平行制备 2 个平皿，并作阴性对照，混匀，凝固，置 2025培养 168 小时，计数。 9. 验证记录10. 验证结论及综合评价评价人： 日期：附表 1：计数培养基适用性检查验证记录试验时间 年 月 日 完成时间 年 月 日验证菌株 平皿号验证培养基组（ cfuml ）阴性对照（cfuml）对照培养基组(cfuml)阴性对照（cfuml）菌落平均数的比值（应在 0.52 范围内）1 -2 -大肠埃希菌(培养 3 天计数)平均值1 -2 -金黄色葡萄球菌(培养 3 天计数)平均值1 -2 -枯草芽孢杆菌(培养 3 天计数)平均值1 -2 -白色念珠菌(培养 5 天开始计数)平均值黑曲霉菌(培养 5 天开始计数)1 -复核人 试验人 复核人 试验人 2 -平均值结论验证报告的审批起草部门 签 名 日 期化验室质量部批准部门 签 名 日 期质量部验证总负责人
