第二章蛋白质的制备-细胞破碎与萃取第一节蛋白质制备总则 来源、 胞内（胞外）、 可溶性、 分子大小、 等电点、 稳定性（对温度、pH、蛋白酶、金属离子的耐受性）等二、方法选择依据： 根据不同蛋白质的性质和研究目的一、目标：高效率、高收率、高纯度、高活性1、蛋白质的性质： 工业化应用：经济性（高收率，纯度次要） 一般研究：80%-90%纯度 结构研究：95%以上纯度 医疗：全面分析2、研究目的： 越到后面的纯化越困难，增加成本，延长操作时间，收率低 考虑产品的质量、数量和经济性三、确立有效成分的测定方法1、蛋白质初步提取和浓缩l 吸附法l 超滤法l 沉淀法（盐析、有机溶剂沉淀、等电点沉淀）l 透析三、确立有效成分的测定方法2、蛋白质高效分离纯化l 色谱法（凝胶过滤、离子交换、亲和色谱等）l 电泳法（聚丙烯酰胺凝胶、等电聚焦、毛细管电泳等）3、根据蛋白质性质确立分离方法l 溶解度不同：等电点，有机溶剂，盐析l 电荷不同：电泳，离子交换l 分子形状大小不同：离心，透析，凝胶过滤四、蛋白质的制备流程：原料液细胞分离(离心，过滤)细胞胞内产物细胞破碎碎片分离清液胞外产物粗分离(盐析、萃取、超过滤
