1、2016年10月选考题32.【加试题】(7分)请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题（1）LB固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加 ，灭菌备用。（2）尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液,用 灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗 ，故用于过滤细菌。然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。（3）取适量含产脲酶细菌的10-4、10-5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是 (A. 10-5稀释液+尿素固体培养基 B. 10-5稀释液+LB固
2、体培养基 C. 10-4稀释液+尿素固体培养基 D. 10-4稀释液+LB固体培养基)。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现 ，其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生 所致。（4）制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是 。,琼脂,高压蒸汽,孔径小，细菌不能滤过,A,红色环带,氨(或NH3),除去游离的脲酶,实验2 分离以尿素为氮源的微生物,一、实验原理,菌种特点：含有_，可以通过降解_（又称为_）作为其生长的氮源。反应方程式为2. 培养基：以_为唯一_的培养基培养，以_为对照。3. 分离的方法：_，获得的菌落，通常以每个培养皿中含有_个以内的单菌落最为
3、合适。,脲酶,尿素,尿素,氮源,LB全营养培养基,涂布分离法,脲,20,大量的尿素的存在会对环境有怎样影响？,如果土壤中有许多尿素，在自然界较高温度下会被水解成氨，氨使土壤碱化，氨还与SO42-等离子形成化合物，使土壤板结。,含有脲酶的细菌利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。（有脲酶的细菌在生态稳态上的作用）,. LB全营养固体培养基和尿素固体培养基的配制与灭菌（课本26页）,（二）实验步骤,（1）配制,尿素培养基（实验组） 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml 水,LB全营养固体培养基（对照组） 蛋白胨
4、： 0.25g 酵母提取液： 0.12g NaCl： 0.25g 琼脂： 0.5g 水,为什么用琼脂糖代替琼脂？,因为琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选，故用纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂,.倒平板,.制备一定浓度梯度的土壤稀释液（细菌悬液）,. LB全营养固体培养基和尿素固体培养基的配制与灭菌（课本26页）,（三）实验步骤,取样时，尽量只取悬液,.倒平板,.制备一定浓度梯度的土壤稀释液（细菌悬液）,.稀释涂布分离法分离细菌,. LB全营养固体
5、培养基和尿素固体培养基的配制与灭菌（课本26页）,.培养观察（倒置，37 24-48h）,（无菌，0.1ml，玻璃刮刀）,（三）实验步骤,取样时，尽量只取悬液,观察现象,LB全营养培养基：菌落多而复杂,尿素培养基：菌落少，单一，菌落周围出现红色区域,下列关于以尿素为氮源微生物培养与分离的相关叙述正确的是()对尿素溶液进行灭菌的最适方法是紫外灯照射灭菌(12浙江改编)培养基分装到培养皿后进行灭菌(13江苏)取单菌落适当稀释,用划线分离法接种于固体培养基表面,在37 培养箱中培养24 h,使其均匀生长,布满平板(13全国)细菌培养实验中进行计数时,应计数的是接种了各个稀释度样品的培养基上的菌落数(
6、14浙江)可以采用涂布分离法来测定活菌数量(15全国改编)从土壤中筛选产脲酶细菌,使用的选择培养基应以尿素为唯一氮源(16四川改编),考点诊断,答案:,(2014台州温岭中学测试)下图是“分离以尿素为氮源的微生物”实验的基本流程，请回答以下问题：(1)A过程配制的培养基有_和_。配制过程中要用_作为培养基的凝固剂，其目的是为了_。B过程尿素溶液用_使之无菌。该实验选用的是涂布分离法，而非划线分离法的好处是_。(2)有关E、F过程，下列实验操作中不正确的是()A. 将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B. 同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板C. 可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照D.
7、用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出能分解尿素的细菌(3)该实验的结果：A同学从培养基中筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因不可能是()土样不同 B. 培养基污染 C. 操作失误 D. 没有设置对照,LB固体培养基,尿素固体培养基,琼脂糖,保证培养基中只有尿素一种含氮物质,G6玻璃砂漏斗过滤,使分离效果更好,D,D,4. 操作步骤：,注意培养基的成分和灭菌法,注意条件，稀释方法,玻璃刮刀的灭菌法,1、（1）高压蒸汽灭菌 无菌水（2）涂布 使水蒸汽凝结成的水滴留在培养皿盖上，若正放，会使已形成的菌落相互混杂 37 需要 （3）C2（1）目的菌 选择 （2）化合物A 异养需氧型 （3）减少 增加（4）划线,（5）血细胞计数 细菌数目的对数 （6）灭菌3、（1）筛选目的菌 固体 尿素 葡萄糖 振荡培养 （2）稀释涂布 灼烧 升高 （3）将A同学的培养基在不加土样的情况下，设置空白对照4、（2）高压蒸汽有机碳显微镜细菌大量繁殖等量生理盐水低巨噬细胞、效应B细胞,
