第二章 基因工程的载体和工具酶第一节 载 体载体必须是复制子。基因克隆的目的是使目的基因在特定的条件下得到扩增和表达,而目的基因本身无法进行复制和表达、不易进入受体细胞、不能稳定维持,所以就必须借助于“载体”及其“寄主细胞”来实现作为基因克隆的载体必须具备以下特性具有合适的筛选标记,便于重组子的筛选。具备多克隆位点(MCS),便于外源基因插入。自身分子量较小,拷贝数高。在宿主细胞内稳定性高。(一)质粒载体的生物学特性(二)质粒载体的制备 (三)质粒载体的改造(四)几个常用质粒载体一 质粒载体(plasimid vectors)(1)质粒是独立于染色体以外的能自主复制的裸露的双链环状(少数为线形和RNA) DNA分子。(一)质粒的生物学特性(一)质粒的生物学特性(2)质粒的大小差异很大,最小的只有1kb,只能编码中等大小的2-3种蛋白质分子,最大的达到200kb。(3)质粒的生存在寄主细胞中“友好”地“借居”,离开了寄主它本身无法复制;同时质粒往往有宿主专一性,如大肠杆菌的复制起点不一定能在其它生物细胞中繁殖。(一)质粒的生物学特性(4)质粒的复制类型(5)质粒的不亲和性根据拷贝数将质粒