核酸的序列测定第五章易发平基础医学院生物化学与分子生物学教研室 DNA的测序是分子生物学研究中非常重要和关键的内容。对DNA一级结构的研究，有助于探索基因结构与功能、基因与疾病关系，进而推动生命科学研究获得质的飞跃。测定基因组的全部核苷酸序列、阅读和分析全部遗传信息，正是人类基因组计划（ human genome project, HGP)的最主要目标之一。将DNA片段用荧光等分析仪，测出DNA序列碱基排列顺序。DNA序列测定方法：v 1.Sanger的双脱氧法：A/T/G/C四个反应。v 2.化学降解法：G反应；G+T反应；T+C反应和C反应。v 3.自动测序法。DNA 测序的主要方法有两种，即双脱氧链终止法（Sanger 法、酶促法）和化学裂解法（Maxam-Gelbert 法）。二者均依赖于高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。不管是酶促法还是化学法，都是分为4个反应体系进行测序反应，寡核苷酸链分别终止于不同位置的A、T、G或C碱基。4种反应体系的寡核苷酸链产物，进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，放射自显影后，读出待测DNA的连续序列。一、 Sanger 双脱氧链终止法 （一）
