实验三、细胞的传代与冻存l 1.细胞培养中为什么添加血清？l 2.使用血清需注意哪些方面？l 3.消化液胰酶的浓度是多少？l 4.使用小滤器过滤要注意哪些？ 针头滤器使用应注意的问题 1.拧紧滤器 2.注射器吸液体 3.注射器插好滤器 4.对着烧杯慢推压针芯看是否漏 5.如不漏对小瓶过滤。 6.滤器放在小瓶瓶口上，取下针头再吸液体，反复多次，滤完。 7.检查滤器滤膜是否完好。一、实验原理 细胞贴壁过程培养细胞一代生长过程 什么时候传代？ 细胞消化的最佳程度 细胞冻存要求冻存条件操作要点 二、实验目的 掌握无菌操作技术。 掌握传代细胞的培养的一般方法与步骤。 掌握培养细胞的消化方法。 了解在倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态和生长状况。三、实验材料及设备 1. 细胞 人宫颈癌HeLa 细胞 人胃癌BGC-823细胞2. 试剂 胰酶、DMEM培养基、血清、DMSO、抗生素 3. 仪器 超净工作台、CO2培养箱、倒置相差显微镜4.其它用品： 培养瓶，试管，移液管，巴斯德吸管，废液缸，75酒精棉球，酒精灯 四、实验步骤1.准备：超净工作台紫外线处理30分钟, 用肥皂洗手, 穿鞋套，用新洁尔灭
