大肠杆菌感受态细胞制备及转化 实验目的 掌握制备和保存大肠杆菌感受态细胞的方法 掌握转化的方法技术 了解转化过程中各因素对转化率的影响感受态及转化实验原理 定义感受态（Competence)：细菌处于容易吸收外源DNA 的状态转化（transformation)：异源DNA分子导入受体细胞的过程致敏过程: 用理化方法诱导细胞进入感受态的操作 在生长周期的任何时刻自动产生感受态；（e.g. 枯草杆菌） 在生长周期的特定时刻产生感受态；（e.g .大肠杆菌）细菌产生感受态的类型 受体菌与质粒的选择u 受体菌： E.Coli DH5 ：无Ap 抗性u 外源质粒 Ampr抗性基因编码一种周质酶（- 内酰胺酶）可特异地切割Amp 的- 内酰胺环，从而使其失去杀菌能力 选择: 如进行蓝白斑筛选时可选用DH5 、JM109 、 TG1 ； 用T7 启动子进行原核表达时可选用BL21(DE3) ；制备感受态细胞方法 原生质体法 电击法 特殊试剂诱导法：CaCl2诱导法u + 质粒DNA420C 热击复苏Amp+ 细菌处于00C,CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形, 外源DNA 形成抗DNA 酶的羟
