分子生物学研究方法课件.ppt

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分子生物学研究方法第一节 基因操作的主要技术原理1核酸的凝胶电泳(Agarose&Polyacrylamide)将某种分子放到特定的电场中,它就会以一定的速度向适当的电极移动。某物质在电场作用下的迁移速度叫作电泳的速率,它与电场强度成正比,与该分子所携带的净电荷数成正比,而与分子的磨擦系数成反比(分子大小、极性、介质的粘度系数等)。在生理条件下,核酸分子中的磷酸基团是离子化的,所以,DNA 和RNA 实际上呈多聚阴离子状态(Polyanions )。将DNA 、RNA 放到电场中,它就会由负极正极移动。2核酸的分子杂交技术在大多数核酸杂交反应中,经过凝胶电泳分离的DNA 或RNA 分子,都是在杂交之前,通过毛细管作用或电导作用按其在凝胶中的位置原封不动地“吸印”转移到滤膜上的。常用的滤膜有尼龙滤膜、硝酸纤维素滤膜,叠氮苯氧甲基纤维素滤纸(DBM )和二乙氨基乙基纤维素滤膜(DEAE )核酸分子杂交实验包括如下两个步骤:1.将核酸样品转移到固体支持物滤膜上,这个过程特称为核酸印迹(nucleicacidblotting) 转移,主要有电泳凝胶核酸印迹法、斑点和狭线印迹法(dotandsl

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