一、抗药性标记及其插入失活选择法pBR322质粒上有两个抗菌素抗性基因: T etr和Ampr。 T etr上有插入位点BamH I和Sal I; Ampr上有插入位点Pst I。第一节 载体表型选择法1. 原理：pBR322（1）四环素：（2）氨苄青霉素抗性基因：2. pBR322抗菌素标记选择产生-内酰胺酶，使氨苄青霉素转变为青霉酮酸，使碘-青霉素指示液（I2-KI-Aampicillin）（蓝灰色）褪色。抑制细菌生长，但不杀死细菌。杀死生长的细菌，但不杀死停止生长的细菌。（3）环丝氨酸：3. 选择过程：如果在T etr上插入外源DNA，导致四环素抗性基因失活，可用四环素加环丝氨酸平板培养基选择重组克隆。T etr失活的菌生长被四环素抑制，不被环丝氨酸杀死，保留下来； Tetr不失活的菌抗四环素，能分裂生长，反而被环丝氨酸杀死。（1）四环素抗性插入失活无环丝氨酸培养基（2）氨苄青霉素抗性插入失活选择过程如果Ampr上插入外源DNA，导致氨苄青霉素抗性基因失活，可用碘-青霉素指示液选择。二、-半乳糖苷酶显色反应选择法-半乳糖苷酶 乳糖半乳糖 葡萄糖Xgal 半乳糖5-溴-4-氯靛蓝+
