第四章第四章 蛋白质化学中的层析蛋白质化学中的层析技术技术v 层析法也称色谱法 (chromatography),是 1906年俄国植物学家 Michael Tswett发现并命名的。他将植物叶子的色素通过装填有吸附剂的柱子,各种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而被分开,由此得名为 “色谱法 ”。v 1941年,英国生物学家 Martin和 Synge首先提出了色谱塔板理论,为后来各种色谱技术的发展奠定了基础。 第一节 层析概述第二节 离子交换层析第三节 亲和层析第四节 凝胶过滤第五节 疏水层析第六节 分配层析第七节 吸附层析第一节 层析概述一、层析的原理层析技术是一组相关分离方法的总称,当待分离的混合物随流动相通过固定相时,由于各组份的 理化性质存在差异 ,与两相发生相互作用( 吸附、溶解、结合 等)的能力不同,在 两相中的分配(含量对比)不同 ,而且随流动相向前移动,各组份不断地在两相中进行再分配,从而达到将各组份分离的目的。二、层析的分类按 固定相 基质的形式: 柱层析、纸层析和薄层层析 根据流动相的形式: 液相层析、气相层析凝胶过滤原理吸附层析疏水层析分配层析亲和层析离子交换三、层析前蛋白质处理主要是利用 盐析法、等电点沉淀、有机溶剂沉淀 等方法,使目的蛋白与其它较大量的杂蛋白分开,这些方法的特点是简便、处理量大、既能除去大量杂质,又能浓缩蛋白质,但分辨率低。