1、现代组织化学技术组织化学与细胞化学1掌握组织化学技术的基本概念2熟悉组织化学和免疫组织化学标本的制备方法及过程3掌握酶组织化学的基本原理4熟悉高碘酸 Schiff（ PAS）反应、过氧化物酶、酸性磷酸酶铅法的基本原理学习要求1. 什么是组织化学与细胞化学技术？-介于细胞生物学、组织学、化学、生物化学、免疫学及分子生物学之间的边缘科学-对组织与细胞的化学成分或者酶活性进行 定性、定位和定量的研究 。常统称为 “ 组织化学”-在保持组织或细胞基本不改变其生活状态时的微细结构的条件下，利用某些特异性的反应，采用显微镜技术观察某些化学成分或酶活性在组织或细胞内的 定性、定位和定量及其变化规律Histo
2、chemistry and cytochemistry一、 绪论2. 组织化学与细胞化学技术的特点HE染色 HE染色普通组织学技术： 组织原位，染色，显微镜观察一、 绪论组织原位，特异性的化学反应，显微镜观察对组织或者细胞内特定物质进行定性，定位， 定量分析 组织化学与细胞化学技术铅法（ ATP酶）2. 组织化学与细胞化学技术的特点一、 绪论PAS法显示粘多糖3. 组织化学与细胞化学技术的主要类型(1) 一般组织化学与细胞化学(2) 免疫组织化学与细胞化学(3) 原位杂交组织化学* 每种均有光镜和电镜之分和定性与定量之分一、 绪论化学方法，类化学方法，物理学方法，显微烧灰方法，免疫学方法，分子
3、生物学方法等常用分类：4. 组织化学与细胞化学技术的基本要求一、 绪论(1) 保持组织和细胞的完整性(2) 被检物质具有不溶性和（或）可视性(3) 反应具有特异性(4) 反应具有灵敏性(5) 可重复性1. 取材（ draw material）(1) 组织标本取材：准备充分、麻醉或处死方法合适、操作迅速、刀应锐利、适当清洗、离体即固定（或冷冻切片，或保存于 -80 冰箱）、大小适中（约 2.5cm2.5cm0.2cm，宁可面积大，不能厚）(2) 细胞标本取材： 涂片法： 培养的悬浮细胞，人体液中的细胞等，细胞密度低时可先沉淀或者离心； 爬片法： 贴壁生长的培养细胞； 印片法： 活组织标本、尸检标
4、本及子宫颈外口等脱落细胞二、 标 本的制 备2. 固定（ fixation）(1) 固定的目的：保持组织细胞原有的形态结构；使组织硬化；对组织化学及细胞化学技术来说 -保存酶活性和蛋白质的抗原性非常重要(2) 固定的优、缺点：优点： 使组织细胞的形态结构得到保持缺点： 拟检物质反应性减弱，酶的活性易受损二、 标 本的制 备二、 标 本的制 备2. 固定(3) 常用固定剂的种类及特点 单一固定剂：A. 交联固定剂甲醛、多聚甲醛、戊二醛 等： 与蛋白多肽链氨基酸侧链的功能基团，如氨基、羟基、酰氨基等结合，使蛋白分子 相互交联， 保存抗原于原位。其 特点是组织形态结构保存好，穿透性强，组织收缩少 。但是，醛基与抗原蛋白氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的空间构象出现障碍， 可能部分 或 完全遮盖抗原决定簇， 在免疫组织化学染色时产生假阴性结果。固定 时 缩短固定时间 （ 824小时）， 降低固定温度 （ 4 ） 、固定 后 充分水洗 、 在免疫组织化学染色之前通过 抗原修复 等可提高抗原反应性 。 常用的有： 10%福尔马林（即 4%甲醛）、 4%多聚甲醛（应用最为广泛） 、 2.5%戊二醛等戊二醛含两个醛基，对膜结构固定更好，但是形成更多的交联，对抗原活性有影响
