实验四：DNA酶切与连接反应1. 实验原理1.1 DNA酶切限制性内切酶能特异性地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异性位点上，并切割双链DNA。根据限制酶的识别切割特性、催化条件及是否有修饰酶活性，可分为I型、II型和III型三类。DNA重组技术中最常用的是II型酶，切割后得到的是带粘性末端或平末端的线性DNA。II型限制性内切酶的识别顺序是一个回文对称顺序，即有一个中心对称轴，从这个轴朝两个方向“读”都完全相同。限制性内切酶的活性以酶的活性单位表示，1个酶单位（1Unit）指的是在指定缓冲液中，37C下反应60min,完全酶切1口g的纯DNA所用的酶量。1.2 DNA连接核酸片段可以通过连接酶的作用连接起来而获得重组分子。DNA连接酶催化双链DNA分子中相邻碱基的5-P末端与3-OH间形成3,5-磷酸二酯键。一个DNA片段的5-P末端与另一个3-OH末端相互靠近时，在DNA连接酶的作用下，在含有Mg2+ATP的缓冲系统中可以被连接起来而形成重组分子。常用的DNA连接酶是T4DNA连接酶，其作用底物是双链
