总RNA的提取(Trizol法提取)在收集到生物材料之后,最好能即刻进行RNA制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80C冷冻柜。在制备RNA时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase的作用。1. 提取组织RNA时,每50100mg组织用1mlTrizol试剂对组织进行裂解;提取细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5-10乂06个细胞加1mlTrizol后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞;2. 将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温1530C下放置5分钟;3. 在上述EP管中,按照每1mlTRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿,盖上EP管盖子,在手中用力震荡15秒,在室温下(15C30C)放置23分钟后,12000g(2C8C)离心15分钟;4. 取上层水相置于新EP管中,按照每1mlTRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇,在室温下(15C30C)放置10分钟,12000g(2C8C)离心10分钟;5. 弃上清,按照每1mlTRI