芥子油苷测定方法.docx

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资源描述

I准备阶段:1. 水浴锅设置80C2. 配制两瓶70%的甲醇,其中一瓶置于水浴锅中温浴。3.5mM苄基芥子油昔.2.33mg/ml4.0.5M醋酸盐(PH=5)30mlHAC,960mlH2O,力口10-20gNaOH粉末,调至PH=55.20mM的醋酸盐,PH=5:将4中的稀释25倍6. DEAEsephadexA-25:称取3g树脂,力口90ml0.5M醋酸盐(PH=5)室温过夜溶解。7. 硫酸酯酶:15mg溶解于6ml20mM醋酸钠中,PH=5(16100uM/hour/g)II芥子油提取1. 取新鲜莲座叶,鲜重5-10mg2. 放入1.5mlEP管中,迅速放入液氮。3. 研磨成粉末后并加入1ml预热的70%的甲醇。4. 加入50ul5mM的苄基芥子油昔5. 盖好盖子漩涡震荡置于冰上,剩下的样品重复步骤3-4。6. 所有的样品置于80C10min。7. 4000rpm,10min。8. 将上清液转移至1.5的离心管。9. 用预热的甲醇重新提取两次,收集所有的上清液至4ml,-20C保存。

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