Western Blot 常见检测方法 化学显色法 如DAB 显色 放射自显影法 如同位素 化学发光法 如 ECL 化学荧光法 如IRdye680 、IRdye780 化学显色法操作简便,无需暗房和 显影设备, 显色直观,但灵敏度 较低,国外已不常 见。 化学发光法(ECL )比化学显色法灵敏度高,可达pg 水平。但由于是 酶促反应,不同曝光 时间得到的信号与样品量不成线性关系 ,不能做准确定量。 荧光法采用荧光检测原理,操作 简单, 荧光信号强弱直接反映目的蛋白量,可 进行精确定量;还可以根据荧光染料的不同,用不同的 荧光二抗可以在同一张膜上同时检测两种蛋白质。不同检测方法特点ECL常见问题 暗房操作麻烦,曝光 时间难以控制,无法准确定量 背景高,高 浓度蛋白易出现“ 吹泡” 现象 检测两种蛋白时,需要Stripping 和Re-probe ,操作复杂 胶片上无法直接观察到Marker解决方案:Odyssey 双色红外荧光成像系统 荧光 红外 双色 荧光准确定量、线性范围宽广 红外背景低、信噪比高 双色同时检测、同时输出Odyssey VS ECL 流程ECL Odyssey1跑胶