在293细胞中大量扩增腺病毒一旦重组病毒已被纯化和鉴定,即可在293 细胞中进行大量扩增。本手册提供了递增培养规模和腺病毒感染周期的基本方法,按这一方法最终得到的病毒量约为3101131012。由于一个细胞中所含的病毒颗粒为100010000,因此1L 培养细胞可得到约51012病毒颗粒。如果要把病毒用氯化铯梯度离心纯化,则必须至少3108的细胞,这样才能正确分辨出病毒带。对于蛋白表达,则根据需要可在任何一步扩增步骤中停止,离心沉淀细胞后按照适当的操作方法进行蛋白抽提(根据蛋白类型的不同抽提上清或细胞沉淀)。为优化时间进程,每个感染周期必须与下一次细胞扩增培养同步。如果由于各种原因不能同步,则必须将病毒冻存,直至下一次细胞培养开始后再融化病毒。注意每次扩增都将会剩下一些病毒,这些病毒先不必丢弃,以便下一步扩增失败时备用。每次扩增最好都用最低代的病毒颗粒,这样产生突变型病毒的可能性会大大降低。操作步骤:1 在100mm 培养皿或75cm2培养瓶中加入10ml DMEM5%培养5 细胞。2 取0.5ul 首次扩增的病毒保存液,加入DMEM5%至