1、- 20 -附件 3消毒产品中氯霉素（chloromycetin ）测定-液相色谱-串联质谱法Method for determination of chloromycetinin disinfestion product-LC-MS-MS method1 范围本方法规定了膏霜类消毒产品中氯霉素残留量液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于膏霜类消毒产品中氯霉素残留量的测定。 取样量为 0.2g 时，本方法氯霉素的检出限 0.03mg/kg。2 规范性引用文件3 原理试样中氯霉素用甲醇提取，提取液经 0.45m 滤膜过滤，用 C8 柱分离后，用液相色谱- 串联质谱仪测定，负离子扫描，离子对定性
2、，峰面积定量。4 试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为不含有机物的纯水，纯水中干扰物的浓度需低于方法中待测物的检出限。4.1 甲醇：农药残留级。4.2 标准品：氯霉素标准品购自北京利科生化科贸有限公司，纯度99%。4.3 标准溶液：准确称取适量的氯霉素标准品，用甲醇（4.1）配制成 10.0mg/mL标准贮备溶液。准确量取上述标准贮备溶液适量，用甲醇稀释配制成浓度为500g/mL 的标准中间溶液，将标准中间溶液转移到安瓿瓶中于 4C 保存。临用前，再根据需要用甲醇配制成不同浓度的标准使用溶液。4.3 0.45m 滤膜。- 21 -5 仪器5.1 液相色谱一串联质谱联用仪：HP110
3、0 高效液相色谱仪(Agilent) - API 4000 质谱仪(Applied Biosystems) ， 电喷雾离子化源(ESIMS， NI/PI 模式)。5.2 分析天平：感量 0.1mg 和 0.001g。5.3 实验室纯水机：Barnstead 纯水机。5.4 涡旋振荡器：Scientific Industries 涡流振荡器。5.5 具塞试管：10mL。6 试样的制备与保存6.1 试样的制备取有代表性样品 5g，搅拌均匀，制成实验室样品。6.2 试样保存制备好的试样置于室温保存。7 测定步骤7.1 样品前处理称取 0.10.2g 样品 (精确到 0.001 g) ，置于 10mL
4、 试管中，加入 3.00mL 甲醇溶液，涡旋振摇使样品分散后，超声振荡 10min。静置，吸取上清液经滤膜（4.3）过滤后，供液相色谱-串联质谱测定。7.4 测定7.4.1 液相色谱条件a）色谱柱： ZORBAX Eclipse XDB-C8，5m，150 4.2mm；b）柱温：25；c）流动相：甲醇 +水（60+40） ， 等度淋洗 10min；d）流速：300L /min；e）进样量： 10L。7.4.2 质谱条件- 22 -a）离子化方式：热喷雾电离(TSI) ；b）扫描方式：负离子扫描；G）检测方式：多反应监测（MRM） ；d）碰撞气(CAD)：11.0 psi；e）气帘气(CUR)
5、：14.0 psi；f）雾化气(GS1)：35.0 psi；g）加热气(GS2)：25.0 psi；h）喷雾电压(IS)：-4500V；i）去溶剂温度(TEM)：350C；j）碰撞室射出电压（CXP）：-16V;k）定性离子对、定量离子对、扫描时间、碰撞气能量和去簇电压，见表 1。表 1 氯霉素的定性离子对、定量离子对、扫描时间、碰撞气能量和去簇电压化合物 定性离子对（m/z）定量离子对（m/z）扫描时间Dwell time（ms）碰撞气能量CE（eV）去簇电压DP（V）321.0/151.0 100 -18 -40氯霉素321.0/255.2321.0/151.0100 -18 -407.4
6、.3 液相色谱-串联质谱测定7.4.3.1 定性测定用氯霉素的定性离子对（m/z 321.0/151.0 和 321.0/255.2）进行定性。7.4.3.2 定量测定将标准中间溶液用甲醇稀释配制成 0-500ng/mL 的标准使用溶液，在仪器最佳工作条件下，标准使用溶液分别进样，以标准使用溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。采用外标法进行定量测定。样品溶液中氯霉素的响应值应在标准曲线线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，氯霉素标准物质液相色谱-串联质谱的多反应监测（MRM）色谱图参见图 A.1。7.5 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定，平行测定相对偏差应小于-
7、 23 -10%。7.6 空白试验除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。8 结果计算样品中氯霉素的质量分数可按式（1-1）计算：)1.(.10mV式中， 消毒产品中氯霉素的质量分数， mg/kg；1从回归方程中查出测试溶液中氯霉素的质量浓度，ng/mL ；V1 提取溶液体积，mL；称样量，g。9 精密度和准确度同一实验室对实际样品和加标样品重复测定，相对标准偏差为 4.0%(数据参见附录 B)。低浓度平均回收率为 77.2%，相对标准偏差为 8.4%；高浓度平均回收率为 109%，相对标准偏差为 9.5%(本方法的添加回收率数据参见附录 C)。- 24 -附录 A (资料性附录)氯霉素
8、标准物质多反应监测(MRM)色谱图氯霉素标准物质多反应监测(MRM)色谱图，见图 A.1。图 A.1 氯霉素标准物质多反应监测(MRM)色谱图- 25 -附录 B (资料性附录)精密度消毒产品中氯霉素精密度试验数据，见表 B.1。表 B.1 消毒产品中氯霉素精密度试验数据含量(mg/kg) 平均值(mg/kg) 标准差(mg/kg) 相对标准差(%)136，152，138，142，142，138 141 5.7 4.0- 26 -附录 C (资料性附录)回收率消毒产品中氯霉素添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表 C.1 和 C.2。表 C.1 消毒产品中氯霉素添加浓度及其平均回收率的试验数据
9、(低浓度)本底值（ng） 添加量（ng） 测得量（ng） 回收率（%）0 688 556 80.80 688 597 86.70 688 546 79.30 688 522 75.90 688 474 68.90 688 492 71.6平均回收率（%）： 77.2标准差（%）： 6.5CV（%）： 8.4表 C.2 消毒产品中氯霉素添加浓度及其平均回收率的试验数据(高浓度)本底值（ng） 添加量（ng） 测得量（ng） 回收率（%）585 688 1207 90.4434 688 1207 112541 688 1265 105434 688 1254 119442 688 1242 116518 688 1289 112平均回收率（%）：109标准差（%）： 10.4CV（%）： 9.5
