当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一方面由于细胞密度过大，细胞与细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物枯竭和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。因此需要将培养细胞进行分离扩大培养，细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的这个过程称为传代(passage)或者再培养(subculture)。1)传代标准传代时间一般通过两个方面进行确定：一是在细胞培养过程中，当培养液由于pH值下降而呈现黄色时，表明细胞已经达到最大密度，需要换液或进行传代培养；二是观察细胞形态，健康细胞形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。初代培养的首次传代很重要，是建立细胞系的关键时期。在首次传代时一般要特别注意以下3点：细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面之前，不要急于传代。原代培养时细胞多为混杂生长，上皮样细胞和成纤维样细胞并存的情况很常见。传代时不同的细胞有不同的消化时间，因此要根据需要，注意观察及时进行处理，并可根据不同细胞对胰蛋白酶的耐受时间不同而分离和纯化所需要的细胞。另外早期传代的培养细胞较已经建系的培养消化时间相对较长。吹
