实验十酵母蔗糖酶的提取、分离纯化及其蛋白质浓度和酶活力测定蔗糖酶催化底物蔗糖分解成葡萄糖和果糖 蔗糖酶在酵母细胞中存在着两种形式:l 存在于细胞膜外细胞壁中的高度糖基化的外蔗糖酶,其活力占蔗糖酶活力的大部分,是含有50(质量分数)糖成分的糖蛋白,该酶是蔗糖酶的主要形式l 存在于细胞膜内侧细胞质中的低糖基化的内蔗糖酶。本实验提取纯化的主要是外蔗糖酶酵母细胞结构图酶是生物体内具有催化活性的物质,可据酶蛋白的结构和性质来选择分离提纯方法和含量测定。酶的分离提纯是为了提高纯度(或比活力)及收率;依据其性质(分子大小、溶解度、电荷、吸附等)进行分离; 同时用测定酶活力的方法了解酶的去向、衡量酶提纯的程度和得率。本实验由四个分实验组成: 蔗糖酶的提取与初步纯化 蔗糖酶各级分酶活力的测定 蔗糖酶各级分酶蛋白质浓度的测定 离子交换柱层析纯化蔗糖酶分实验一:蔗糖酶的提取与初步纯化一、实验目的 学习蔗糖酶分离提取的原理 学习掌握细胞破壁、有机溶剂沉淀蛋白质的原理与操作二、实验原理 细胞破碎的方法高压匀浆破碎法(homogenization) 振荡珠击破碎法(Skaking Bead) 高速搅拌珠研磨破碎法