1、核酸提取送检样本的要求,一、样本要求-送检样本类型1,除了检测VEGFR2表达、融合基因EML4-ALK和ROS1可以送外周血和血浆之外，检测其它RNA不建议送外周血及血浆（血液中RNA含量少浓度低，检测出的结果不可靠）。,送检样本优先级别：现有技术流程下1）、首选病理组织和穿刺组织（适合所有生物标志物biomarker）2）、其次为胸腹水（鉴定含肿瘤细胞后检测为宜，不能检测MSI） 3）、最差用外周血（有核细胞能检测SNP；血浆/血清能检测ctDNA、融合基因、VEGFR2 mRNA） 外周血送检样本1）、抽提有核细胞检测SNP；2）、抽提血浆检测突变类（检测ctDNA 、融合基因、VEGF
2、R2 mRNA ）,一、样本要求-送检样本类型2,二、样本要求-送检样本量,三、样本要求-保存方法,新鲜组织（包括手术和活检组织）价值：肿瘤新鲜冷冻材料可提取出最高品质的DNA、RNA。在手术现场取样的情况也比较多，但需要在显微镜下确认肿瘤细胞含量。周围炎症严重的肿瘤、黏液产生过高的肿瘤、病变中心广泛纤维化的肿瘤细胞不能采集，以免产生假阴性结果。鉴定：切割后取其中一半，并利用另一半切面制作组织标本，然后在显微镜下确认肿瘤细胞含量。保存：理想的保存方法是迅速置于液氮中，然后保存于液氮罐或-80冰箱，这一过程应在手术样本离体后30分钟内完成。或者保存在组织保存液中；也可保存在核酸提取液中。,三、样
3、本要求-保存方法,石蜡包埋组织（formalin-fixed paraffin-embedded，FFPE）10%中性福尔马林固定手术切除样本，按病理学操作规范进行取材。 DNA容易受固定的影响，长时间（1周以上）浸泡在福尔马林中的样本的DNA会被片段化，不能检出突变。活检材料的固定时间一般是24小时，对于穿刺等活检样本，固定时间控制在624小时为佳。价值：石蜡包埋组织易长期保存。鉴定：制作石蜡切片后，切取5片连续切片，其中1片进行HE染色，确认肿瘤细胞的含量。在高灵敏度检测方法中，可考虑使用活检标本。保存：15摄氏度28摄氏度。,三、样本要求-保存方法,胸腹水等细胞学样本用胸腹水中的肿瘤细胞
4、用于基因检测时，必须确认肿瘤细胞，穿刺获得胸腹水样本提交给细胞病理检查之后，剩余液体冷藏/冷冻保存，由于细胞学样本的肿瘤细胞含量较低，因此必须使用高灵敏度检测方法。价值：取样方便。鉴定：制作石蜡切片后，切取5片连续切片，其中1片进行HE染色，确认肿瘤细胞的含量。保存：离心收集后冷冻保存；也可在含有细胞成分的离心沉淀中加入含有蛋白质变性剂的缓冲液（AL缓冲液，Qiagen公司）等室温保存。,三、样本要求-保存方法,外周血样本价值：取样方便。用途：ct DNA、CTC检测保存：取样时应使用一次性密闭EDTA抗凝真空采血管，采集610ml全血，冷藏运输，6小时内分离血浆，提取游离DNA，保存到-80
5、冰箱中，并避免反复冻融。如外周血需长时间运输，建议用商品化的游离DNA样本保存管，在常温条件下，cfDNA在全血中可稳定保存7天。血清或血浆离心收集后冷冻保存；有核细胞检测CTC的冷藏保存，检测SNP的冷冻保存。,名词解释,实体瘤即有形瘤，可通过临床检查如x线摄片、CT扫描，B超、或触诊扪及到的有形肿块称实体瘤。非实体瘤即X线、CT扫描、B超及触诊无法看到或扪及到（摸到、按到）的肿瘤，如血液病中的白血病就属于非实体瘤。血液病是原发于造血系统的疾病，或影响造血系统伴发血液异常改变，以贫血、出血、发热为特征的疾病。造血系统包括血液、骨髓单核一巨噬细胞系统和淋巴组织，凡涉及造血系统病理、生理，并以其
6、为主要表现的疾病，都属于血液病范畴。,名词解释,循环游离DNA(circulating free DNA，cfDNA)是存在于血浆中的游离DNA，它们有的来自于正常细胞，有的来自于异常细胞（如肿瘤细胞），肿瘤来源的DNA占血浆游离DNA的比例在不同肿瘤及病例中相差悬殊（0.0193%），从而限制了外周血在肿瘤分子检测时的应用。目前已有多篇文献证实可利用从血浆游离DNA检出突变，但需要使用ARMS法等灵敏度非常高的检测方法。,名词解释,循环肿瘤细胞（circulating tumor cell，CTC），是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称。循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA, ctDNA ），是指肿瘤细胞体细胞DNA经脱落或者当细胞凋亡后释放进入循环系统的DNA片段，是一种特征性的肿瘤生物标记，通过ctDNA检测，能够检出血液中的肿瘤踪迹。ctDNA 检测很少出现假阳性，因为 ctDNA来自肿瘤细胞基因组突变。在几乎所有种类的癌症中，都检测到了ctDNA所带有的标志性突变，并且肿瘤越晚期，病情越严重，肿瘤的恶性程度越高， ctDNA特有突变的频率就越高。,谢谢！,
