血清蛋白质浓度定量测定课件.ppt

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资源描述

BCA法定量蛋白质浓度n BCA法是近来广为应用的蛋白定量方法。n 操作简便,快速,灵敏度高,准确,试剂稳定性好,经济实用,抗干扰能力强【原理】:碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+,Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。【原理】:基本原理n BCA(bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量:n 在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu+(biuret reaction)。BCA与Cu+结合形成稳定的紫蓝色复合物,在562 nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比,据此可测定蛋白质浓度。 n【试剂】n 1、 试剂A :n 分别称取10g BCA 二钠盐、20g无水碳酸钠、0.16g酒石酸钠、4g氢氧化钠 、9.5g碳酸氢钠,混合调PH 值至11.25 ,加水至1L 。 n 2、 试剂B :4硫酸铜。 n 3、 BCA 工作液:n 试剂A 100ml 试剂B 2ml 混合。 操作步骤n 1.先将solutionA摇晃混匀,根据样品数量,按50体积solutionA加1体积solutionB

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