第五章细胞培养基本技术培养技术细胞系的建立和鉴定培养物的固定、染色显微镜观察一、细胞培养技术 基本操作技术 细胞原代培养 细胞传代培养 细胞冻存和复苏 细胞的运输(一) 细胞培养基本操作技术 体外培养细胞无抗感染能力 防止污染是决定培养是否成功的首要条件 无菌、有条不紊 制定好实验计划和操作程序,相关数据提前计算好 按照实验需求,准备所需各种器材和物品 正确放入操作场所(培养室、超净台) 开始消毒 -培养细胞和培养用液勿照射紫外线 -工作台勿放置过多或重叠物品培养前的准备工作 75%酒精手消毒 动作要准确敏捷,不可太快 不用手触及已消毒器皿 火焰灼烧消毒操作(二) 细胞的原代培养(primary culture) 是将机体内的某组织取出,分散成单细胞,在人工条件下培养使其生存并不断生长繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制、细胞的衰老、死亡等生命现象。 幼稚状态的组织和细胞,如动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养意义 原代培养的最大优点是细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大变化,具有二倍体的遗传性,而且大多数细胞表现出原来组织的特性。 原代培养细胞呈活跃状态