实验三、质粒DNA的限制性酶切鉴定、割胶回收与纯化（10学时） 1. 内切酶的作用原理 2. 常用的酶切体系及作用条3. 影响酶切的因素4. 电泳检测5. 胶回收试剂盒的操作步骤及注意事项概述 没有核酸限制性内切酶的发现和应用，就没有分子生物学的兴旺发展，在基因工程和分子生物学中，没有一种酶像限制性内切酶那样举足轻重和应用广泛。 限制性内切酶均来源于原核生物，它们的功能类似高等动物的免疫系统，用于抗击外来DNA的入侵。 核酸限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA的酶，即是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶。限制性内切酶作用于磷酸二酯键，使双链DNA中两条单链上的3,5-磷酸二酯键断裂，产生的DNA片段5端为P,3端为OH,是基因工程的第一步获取目的基因所必须用的酶。 限制性内切酶可分为三类:类和类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)DNA作用，且依赖于ATP的存在。类酶结合于识别位点并随机切割识别位点不远处的DNA，不产生特异片段，故在基因重组中没有应用价值。而类酶在特异识别位点上切割DNA分子，其
