单克隆抗体制备课件.ppt

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资源描述

单克隆抗体制备Monoclonal antibody 单个B 淋巴细胞克隆所产生的针对同一个 抗原决定簇的抗体。分三个阶段:(1 )免疫Balb/c 小鼠(2 )建立筛选方法和程序(3 )杂交瘤的生成一、动物免疫1 Balb/c 小鼠6-8 周龄,25g 左右,雌性较佳2 免疫方法(1 )首次腹腔免疫0.5 ml 抗原与福氏完全佐剂 1 :1 的混和液,一般2-3 只鼠(2 )30 天后加强免疫,用福氏不完全佐剂(3 )15 天后,尾静脉注射0.1mL 水剂抗原,免疫 3 天后,去脾脏融合 对于抗原性弱的抗原,可增加免疫次数,具体 程序依抗原性质而定。可溶性蛋白(提取或表达的蛋白) 50-100g颗粒性蛋白(病毒) 50-100g细菌 106CFU活细胞 (哺乳动物细胞) 105-7CFU活癌源细胞 104-6CFU糖类(多糖、糖蛋白) 100-200g核酸 100-200g1 在液氮罐中取保存的SP2/0 细胞,以 MEM 培养基复苏,37 CO2 培养箱中培养2 在对数生长期收获107-108CFU 的 SP2/0 细胞3 500 g 离心5min ,弃上清4 轻轻振动离心管以松动

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