第五节 目的基因与载体连接基因工程之二、 目的基因与载体的连接（接）质粒 DNA分子一个切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA 连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种 限制酶目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 （主要有以下4种连接方式） 1) 粘性末端连接 2） 平头末端连接 3） 人工接头法 4） 同源多聚尾连接法工具酶：基因工程中的工具酶主要包括用于DNA和RNA分子的切割、连接、聚合、逆转录等相关的各种酶类。几种重要的工具酶 活性 限制性核酸内切酶 识别特异碱基序列，切割DNA DNA连接酶 催化DNA5-磷酸与3-羟基 形成磷酸二酯键 DNA聚合酶 以DNA为模板合成DNA 逆转录酶 以RNA为模板合成cDNA 碱性磷酸酶 切除5末端磷酸T4多聚核苷酸激酶 催化核酸5-羟基磷酸化末端脱氧核苷酸转移酶 催化3-端合成同聚尾 E. coli DNA 连接酶只能催化互补粘性末端之间的连接DNA 连接酶（DNA ligase）能催化双链DNA片段紧靠在一起的3-OH 末端与5-P末端之间形成磷酸二酯键，使末端连接。 T4 DNA 连接酶催化互补粘性末端和
