一、实验目的 学习掌握琼脂扩散试验的原理与应用 熟悉掌握其基本操作方法2二、实验原理 沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体特异性结合,在二者比例适当并有电解质存在及一定的温度条件下,可形成肉眼可见的沉淀物的反应。 免疫扩散法就是使抗原与抗体在琼脂糖凝胶中自由扩散而相遇,从而形成抗原抗体复合物,由于此复合物分子量增大并产生聚集,不再继续扩散而形成肉眼可见的带状或线状沉淀带。3 利用琼脂糖凝胶作为扩散介质是因为一定浓度的琼脂糖凝胶,其内部为多孔网状。而且孔径很大,可以允许大分子物质(分子量自十几万到几百万以上)自由通过。因为大多数抗原和抗体的分子量都在20万以上,所以它们在琼脂糖凝胶中几乎可以自由扩散。而且琼脂糖凝胶又具有良好的化学稳定性、含水量大、透明度好、来源方便、处理容易等优点,因此是免疫沉淀检测技术中最理想的扩散介质。 沉淀线的形状、位置,与抗原的浓度、扩散速度相关。 4 琼脂扩散试验可在试管内、平皿中以及玻片上的琼脂中进行。又可分为单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验两类。5应用(1)抗原或抗体的纯度鉴定。也可对抗体效价进行初步估算。(2)用已知抗血清(或抗原)检测未知抗原(或抗体)(