常用实验基本技术四大常用基本技术 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 免疫组织化学技术(免疫组化) 免疫印迹技术(Western blot) 细胞培养技术常用分子生物学技术 RNA的提取和cDNA合成聚合酶链式反应(PCR)扩增和产物克隆重组质粒的连接、转化及筛选质粒DNA的分离、纯化和鉴定测序技术 DNA酶切及凝胶电泳局限性 联合应用RNA制备 Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克。用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。RNA可直接用于Northern斑点分析,斑点杂交, Poly(A)+分离,体外翻译,RNase封阻分析和分子克隆。 RNA提取试剂盒:国产、进口 常用总RNA提取试剂盒 尽量选用含DNA酶的试剂盒步骤以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨,注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。 研磨液室温放置5分钟,然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管,用手剧烈摇荡离心管15秒。 取上层水相于一新的离心管,按每mlTrizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙