实验二 微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验目的l学习微量凯氏定氮法的原理l掌握微量凯氏定氮法的操作技术(未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等)实验原理l 凯氏定氮法常用于测定天然有机物(如蛋白质,核酸及氨基酸等)的含氮量。l 当天然含氮有机物与浓硫酸共热时,其中的碳、氢被氧化成二氧化碳和水,而氮则变成氨并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程称为“消化”。l 此过程进行的相对较为缓慢,通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应的沸点,并加入硫酸铜作为催化剂,以促进反应的进行。氧化剂过氧化氢也能加速反应。消化过程 :含氮有机物+H2SO4 CO2+SO2+H2O+NH3l蒸馏:在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性,加热蒸馏,即可释放出氨气,反应方程式如下:l吸收与滴定:蒸馏所放出的氨,可用硼酸溶液进行吸收,待吸收完全后,再用盐酸标准溶液滴定,直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止(即滴定至蓝紫色),最后根据所用标准酸的当量数(相当于待测物中氨的当量数)计算出待测物中的氮量。 实验材料与试剂l实验材料:食用面粉l实验试剂:浓硫酸30%氢氧化钠溶液克氏催化剂2%硼酸指示剂0.01M HCL实验