核酸检测技术课件.ppt

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核酸检测技术核酸检测技术直接对动植物有害生物基因序列和结构进行测定。核酸的分离纯化PCR技术核酸杂交技术第1节核酸的分离纯化核酸的分离纯化的原则1. 保持核酸一级结构的完整性2. 提高核酸制品的纯度技术路线的设计破碎细胞的方法机械 (匀浆、超声破、研磨等)非机械(化学处理、生化法)沉淀是浓缩核酸最常用且高效的方法。优点 缺点乙醇 对盐类沉淀少,易挥发除去,不影响后续实验需要量大,低温操作异丙醇 需体积小,速度快,一般不需低温长时间放置易使盐类、糖类与DNA共沉淀;异丙醇难以挥发除去核酸浓度检测与完整性测定方法浓度测定 紫外分光光度法 260nm 荧光光度法 EB 荧光完整性测定琼脂糖凝胶电泳法:以EB为示踪剂的核酸凝胶电泳结果为依据。基因组DNA片段如发生降解,电泳图呈拖尾状;完整的或降解很少的总RNA电泳图谱中,三条带的荧光强度积分应呈特定的比值问题一:DNA样品不纯 抑制后续酶解和PCR反应DNA提取常见问题DNA提取常见问题问题二: DNA降解DNA提取常见问题问题三: DNA提取量少真菌昆虫第2节PCR扩增技术PCR, a DNA photocopierPCR技术简史 DNA的

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