一.寻找目的基因mRNA序列及CDS阅读框（蛋白质对应的基因序列）1.选中CDS开发阅读框（表达蛋白的序列）基因序列，共162个碱基；2.注意CDS特征，前段非编码区如果太长，需要增加保护序列；后端非编码区如果长，则说明CDS序列稳定可用；将查到的CDS序列粘贴至new DNA file框中，选择linear类型DNA，软件即可自动分析该段序列中的可能酶切位点二.登录http:/ 前的序列插入目的基因序列，并选择features给插入的目的基因命名UGT1A1在目的基因的终止密码子TGA前还需再加上HA tag标签（阳性对照蛋白，即质粒转染并成功表达的话，该段蛋白必定存在，可用WB测出），标签序列登录addgene官网查询：https:/www.addgene.org/mol-bio-reference/genetic-code/三.克隆引物设计1.电脑设计：回到NCBI的primer blast，拷贝目的基因CDS序列(共1602个碱基)，在框中输入|a|和CDS序列，并在Min 和Max分别输入1602（表示blast CDS全部基因）；2.手工设计：遵循GC尽量少，Tm尽量小的原
