第五章--PCR实验中的样本制备课件.ppt

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资源描述

PCR实验中的核酸制备技术海南省农垦总医院 朱中元教授、主任技师、Ph D 在临床基本扩增检验中,由于临床标本中常含有蛋白和脂类等干扰核酸扩增的物质,因而核酸提取是进行核酸扩增前不可或缺的一个步骤。核酸分离纯化技术起源于20世纪50年代,在70年代和80年代中传统的核酸沉淀溶解分离纯化方法得到了普遍的应用和推广,但由于传统的核酸提取方法常涉及去垢剂裂解、蛋白酶处理、有机溶剂提取及乙醇沉淀等步骤,不但繁琐,而且增加了环境因素对标本以及标本间相互污染的机会,不但在RNA检测时,易出现假阴性,而且当使用极为敏感的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)及体外转录扩增系统检测时,易得到假阳性结果。同时,由于这些方法要用到一些挥发性的有机溶剂,故对实验操作人员的身体健康有一定的影响。因此,简单而又高效且无需使用酚和氯仿的核酸提取方法对上述敏感的基因扩增检测技术的广泛应用有重要意义。此外,标本的处理及保存对DNA和RNA(尤其是RNA)的影响较大,因此,在核酸测定时,样本的处理及保存,对保证测定的准确有效尤为重要。临床基因扩增检验中常涉及的标本有血清(浆)、全血

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