1、人氧化型高密度脂蛋白酶联免疫分析 试剂盒使用 方法 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 96T 6.0mol/L -160mol/L 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中氧化型高密度脂蛋白（ ox-HDL)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人氧化型高密度脂蛋白（ ox-HDL)水平。用纯化的人氧化型高密度脂蛋白（ ox-HDL)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入氧化型高密度脂蛋白（ ox-HDL)，再与 HRP 标记的氧化型高密度脂蛋白（ ox-HDL)抗体 结合，形成抗体 -抗原 -酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色
2、。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的氧化型高密度脂蛋白（ ox-HDL)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中人氧化型高密度脂蛋白（ ox-HDL)浓度。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml 1 瓶 7 终止液 6ml 1 瓶 2 酶标试剂 6ml 1 瓶 8 标准品（ 320 mol/L） 0.5ml 1 瓶 3 酶标包被板 12 孔 8 条 9 标准品稀释液 1.5ml 1 瓶 4 样品稀释液 6ml 1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂 A 液 6ml 1 瓶 1
3、1 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml 1/瓶 12 密封袋 1 个 标本要求 1标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 -20保存，但应避免反复冻融 2不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照 下列图表在小试管中进行稀释。 160 mol/L 5 号标准品 150 l 的原倍标准品加入 150 l 标准品稀释液 80 mol/L 4 号标准品 150 l 的 5 号标准品加入 150 l 标准品稀释液 40 mol
4、/L 3 号标准品 150 l 的 4 号标准品加入 150 l 标准品稀释液 20 mol/L 2 号标准品 150 l 的 3 号标准品加入 150 l 标准品稀释液 10 mol/L 1 号标准品 150 l 的 2 号标准品加入 150 l 标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50 l，待测样品孔中先加样品稀释液 40 l，然后再加待测样品 10 l（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置 37温育 30
5、分钟。 4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。 6. 加酶：每 孔加入酶标试剂 50 l，空白孔除外。 7. 温育：操作同 3。 8. 洗涤：操作同 5。 9. 显色：每孔先加入显色剂 A50 l，再加入显色剂 B50 l，轻轻震荡混匀， 37避光显色 15 分钟 . 10. 终止：每孔加终止液 50 l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。 计
6、算 以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数； 或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4 请每次测定的同时做标准曲线，最 好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（ n 5）。 5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6底物请避光保存。 7严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 . 8所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9本试剂不同批号组分不得混用。 保存条件及有效期 1试剂盒保存：； 2-8。 2有效期： 6 个月
