第六章 基因文库的构建与目的基因的获得基因工程主要是通过人工的方法分离、改造、扩增并表达生物的特定基因,从而深入开展核酸遗传研究或者获取有价值的基因产物。通常将那些已被或者准备要被分离、改造、扩增或表达的特定基因或DNA片段,称为目的基因。要从数以万计的核苷酸序列中挑选出非常小的所感兴趣的目的基因,是基因工程中的第一个难题。欲想获得某个目的基因,必须对其有所了解,然后根据目的基因的性质制定分离的方案。目前主要应用化学合成法、目的基因的直接分离法和逆转录法来分离、获得目的基因。PCR技术的问世及其在基因工程中广泛应用,已经大大简化了构建和筛选cDNA文库的工作。此外,新发展起来的转座子标签法(transposontagging)、mRNA差异显示法(mRNAdifferentialdisply)、RFLP及ESTs等技术也已经在分子克隆工作中展现出广阔的前景。6.1基因文库的构建基因组文库(genomicDNAlibrary)是指将基因组DNA通过限制性内切酶部分酶切后(必要时对这些DNA片段进行密度梯度离心或经制备型凝胶电泳进行分级分离,以选择长度适合于插入载体的片段)所产生的基因组片