第四节 基因的分离和获得中国药科大学生物制药教研室目标基因克隆的三大战略：目标基因克隆的三大战略：1.1.利用利用PCRPCR技术或化学合成法体外直接合成目技术或化学合成法体外直接合成目的基因，然后将之克隆、表达；的基因，然后将之克隆、表达；2.2.构建感兴趣的生物个体的基因组文库或构建感兴趣的生物个体的基因组文库或cDNAcDNA文库；文库；3.3.利用基因差异表达获得目的基因。利用基因差异表达获得目的基因。基因的分离和获得的常用方法基因的分离和获得的常用方法一、基因分离的物理方法二、鸟枪法(Shotgun)又称霰弹法三、cDNA文库的建立与基因的分离四、基因组文库法五、基因的化学合成六、聚合酶链反应技术（PCR）一、基因分离的物理方法 根据DNA分子的两条链存在着GC，A=T碱基配对。如DNA分子中某段的GC碱基对含量高，则其热稳定性就高，其溶解温度（Tm）就高。这样，人们通过控制溶解温度使富A=T区解链变性，而富GC区仍维持双链。当利用单链核酸酶S，酶去除解开的单链部分，得到富GC区的DNA片段。二、鸟枪法(Shot gun)又称霰弹法 用限制性内切酶将基因组DNA进行切割，得到
