1、微生物检测的基本操作知识微生物检测的基本操作知识主要内容主要内容： 1 清洗、消毒和灭菌 清洗、消毒和灭菌 2 显微操作 显微操作 3 制片和染色 制片和染色 4 培养基的制备 培养基的制备 5 接种、分离纯化和菌种保存 接种、分离纯化和菌种保存 6 微生物常规鉴定技术 微生物常规鉴定技术 1 清洗、消毒和灭菌 清洗、消毒和灭菌1. 玻璃器皿的清洗 1.1新购的玻璃器皿 浸泡于的工业盐酸中数小时，除去游离的碱性物质1.2用过的玻璃器皿 污染的器皿，必须经过适当消毒， 污迹不能洗净时，可浸泡于洗液内。 1.3洗液的配制 称取重铬酸钾 100g与 1000mL水置大烧瓶中加热搅拌溶化，待冷却后，将
2、烧瓶置冷水中，慢慢加入浓流酸 250mL，并不断搅拌。 消毒灭菌的方法消毒灭菌的方法 u （一）物理消毒灭菌法（一）物理消毒灭菌法u （二）化学消毒法（二）化学消毒法 （一）物理消毒灭菌法（一）物理消毒灭菌法1.热力灭菌法热力灭菌法 热力灭菌法分 热力灭菌法分 干热灭菌干热灭菌 和和 湿热灭菌湿热灭菌 两两大类。在同一温度下，大类。在同一温度下， 后者效力比前者后者效力比前者为大，这是因为：为大，这是因为： （ 1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固；）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固；（ 2）湿热的穿透力比干热大；）湿热的穿透力比干热大；（ 3）湿热的蒸汽有潜热存在。水由气态变）湿热的蒸汽有潜热存在。水由
3、气态变为液态时释放出的潜热，可迅速提高被灭为液态时释放出的潜热，可迅速提高被灭菌物体的温度。菌物体的温度。 加热灭菌和加热消毒的方法加热灭菌和加热消毒的方法：干热灭菌法干热灭菌法 火焰灭菌法火焰灭菌法干燥加热空气灭菌法干燥加热空气灭菌法高温灭菌高温灭菌 巴氏消毒法巴氏消毒法常压下常压下 煮沸消毒法煮沸消毒法湿热灭菌法湿热灭菌法 间歇灭菌法间歇灭菌法常规加压灭菌法常规加压灭菌法加压下加压下 (高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法 )连续加压灭菌法连续加压灭菌法干热灭菌法干热灭菌法1.焚烧：焚烧： 是一种彻底的灭菌方法，但仅适用于废是一种彻底的灭菌方法，但仅适用于废弃物品或尸体等。弃物品或尸体等。2.烧灼
4、：烧灼： 直接用火焰灭菌，适用于微生物学实验直接用火焰灭菌，适用于微生物学实验室的接种环、试管口等的灭菌（图室的接种环、试管口等的灭菌（图 3-2）。）。3.干烤：干烤： 用烤箱灭菌。一般加热至用烤箱灭菌。一般加热至 160 170经经 2小时。适用于高温下不变质、不蒸发的物小时。适用于高温下不变质、不蒸发的物品，品， 如玻璃器皿、瓷器等。如玻璃器皿、瓷器等。 。 湿热灭菌法湿热灭菌法u 1.煮沸法：煮沸法： 1个大气压下，煮沸的水温为个大气压下，煮沸的水温为 100 ，一般细菌繁殖体，一般细菌繁殖体煮沸煮沸 5分钟即被杀死。细菌芽胞常分钟即被杀死。细菌芽胞常 需煮沸需煮沸 1小时，才被杀死小
5、时，才被杀死。水中加入。水中加入 2%碳酸钠，既可提高沸点达碳酸钠，既可提高沸点达 105 ， 促进细菌芽胞的促进细菌芽胞的杀灭，又杀灭，又 可防止金属器皿生锈。可防止金属器皿生锈。u 2.巴氏消毒法巴氏消毒法 （ pasteurization） :用较低温度杀灭液体中的病用较低温度杀灭液体中的病原菌、同时又不影响消毒物品的营原菌、同时又不影响消毒物品的营 养成分及香味的消毒方法。养成分及香味的消毒方法。加热加热 61.1 62.8 半小时即可，常用于牛奶和酒类等的消毒。半小时即可，常用于牛奶和酒类等的消毒。 l3. 间歇灭菌法 （ fractional sterilization） :将待灭
6、菌的物品 100 加热 15 30分 钟，杀死其中的细菌繁殖体，然后将物品置于 37 温箱中过夜使芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸 汽加热，如此连续三次，可将所有细菌繁殖体和芽胞全部杀死。 l4.高压蒸汽灭菌法： 是灭菌效果最好、目前应用最广的灭菌方法。方法是在一密闭蒸锅 高压蒸汽 灭菌器内进行的。通常 在1.05kg/cm2的压力下，温度达 121.3, 维持 15 30分钟，可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物。 此法适用于耐高温和不怕潮湿物品的灭菌。2.紫外线与射线灭菌法紫外线与射线灭菌法u 1.紫外线：紫外线： 紫外线波长为紫外线波长为 240 280nm时具有杀菌作时具有杀菌作用，其
7、中用，其中 以以 260nm最强。紫外线杀菌机理主要是作最强。紫外线杀菌机理主要是作用于细菌用于细菌 DNA，使同一条，使同一条 DNA 链上相邻的两个胸腺链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成嘧啶二聚体，因而改变嘧啶共价结合而形成嘧啶二聚体，因而改变 DNA的的分子构型，干扰细菌分子构型，干扰细菌 DNA的复制与的复制与 转录，导致细菌转录，导致细菌的死亡或变异。紫外线穿透力差，故只适用于空气的死亡或变异。紫外线穿透力差，故只适用于空气及不耐热物品的表面消毒。及不耐热物品的表面消毒。 u 2.电离辐射：电离辐射： 高速电子、高速电子、 X 射线和射线和 射线等在足够射线等在足够剂量时，对各种细菌均有致死作用。其机制在于剂量时，对各种细菌均有致死作用。其机制在于 产生游离基，破坏细菌产生游离基，破坏细菌 DNA。电离辐射常用于大量。电离辐射常用于大量一次性医用塑料制品的消毒。一次性医用塑料制品的消毒。
