基因工程原理动物细胞的基因转移幻灯片Introduction动物细胞的基因转移已应用了40多年研究基因功能和调控或者生产大量的重组蛋白哺乳动物细胞系,杆状病毒表达系统体内基因治疗不同于转基因动物动物细胞基因转移的策略直接DNA转移 显微注射,基因枪转染技术 利用化学和物理技术诱导细胞从外界环境摄取DNA病毒介导转导细菌介导细菌感染转染技术化学方法(不同的方法有相似的原理)DNA/磷酸钙共沉淀法 其他化学方法 脂质体转染物理方法(有多样的机制)电穿孔,显微注射,基因枪DNA/磷酸钙共沉淀法HPRT缺陷型的细胞DNA/磷酸钙共沉淀为复合物,积累到细胞膜上,然后再由细胞摄取到内部,并转运到细胞核,DNA释放并得到表达沉淀物要现用现配沉淀物必须包裹细胞,只适用于单层生长的细胞,而不适用悬浮或成团生长的细胞转染效率低其他的化学转染方法二乙氨乙基葡聚糖(DEAE-dextran)可溶性聚阳离子糖类,可以促进DNA与胞吞相互作用瞬时转染效率很高,但不能形成稳定转化的细胞系脂质体转染脂质体转染 Lipofection(liposome transfection)将DNA包装到一个磷脂泡囊中,泡囊可以与