1、核酸分子杂交技术李如波中国医科大学法医学院核酸分子杂交技术 (Nucleic acid molecular hybridization)是检测核酸分子间序列同源性的一种技术。不同来源的核酸单链只要彼此间有一定的互补序列，即可按碱基配对规则以氢键相结合。通常是先对一种核酸进行标记（如放射性同位素 35S， 32P或生物素等）作为探针，去探测另一种核酸序列。核酸分子杂交可以在 DNA与 DNA，RNA与 RNA，或 DNA与 RNA之间进行。由于这种技术具有高度的特异性和灵敏性，已广泛应用于生物学、医学科学研究，临床传染病和遗传病的诊断。一、核酸分子杂交的基本原理一、核酸分子杂交的基本原理从化学和
2、生物学意义上理解，探针 (Probe)是一种分子，它带有供反应后检测的合适标记物，并仅与特异靶分子反应。抗原 -抗体、外源凝集素 -碳水化合物、亲和素-生物素、受体 -配体 (ligand)以及互补核酸间的杂交均属于探针 -靶分子反应。蛋白质探针（如抗体）与特异靶分子是通过混合力（疏水、离子和氢键）的作用在少数特异位点上的结合，而核酸探针与互补链的反应则是根据杂交体的长短不同，通过氢键在几十、几百甚至上千位点上的结合。核苷酸经某一原子、功能基团或长侧链修饰后仍有可能进行碱基配对，这取决于修饰的部位和修饰物的性质。标记的探针每 1kb只掺入 10-30个修饰碱基，仅 4 -12的单个碱基被修饰的类似物取代了。尽管掺入位点外的碱基配对较弱或不存在，但对整个杂交分子的稳定性影响很小。 原位杂交原理示意图二、核酸探针的种类二、核酸探针的种类根据标记方法不同可分为：根据标记方法不同可分为：放射性探针；非放射性探针两大类，根据核酸的性质不同又可分为：根据核酸的性质不同又可分为：DNA探针RNA探针cDNA探针cRNA探针DNA探针还有单链 (ssDNA)和双链 (dsDNA)之分。所以原位杂交可分为 DNA-DNA， cDNA-RNA，RNA-RNA和寡核苷酸与 DNA或 RNA等杂交方式。
