1、猪2型圆环病毒相关疾病及其控制策略曹胜波等写 操继跃教授讲授,猪圆环病毒（porcine circovirus, PCV）由Tischer等1974年在PK-15（ATCC-CCL）细胞中发现，当时认为是一种细胞污染物，8年后他们发现，该污染物是一种小的无囊膜的二十面体的单链环状病毒。圆环病毒的出现使病毒家族又增加了新的成员。在ICTV（Innternational Committee on the Taxonomy of Viruses）发表的第6次病毒分类报告中，人们将猪的圆环病毒（PCV）、鸡贫血病毒（Chicken Anaemia Virus, CAV）、鹦鹉喙羽病毒（Psittaci
2、ne Beak and Feather Dissease Virus, PBFDAV）3种病毒设立一个新科，即圆环病毒科，下设一个圆环病毒属。,一、病毒理化性质 猪圆环病毒粒子为20面体对称结构，其直径大小为17nm，是已发现的动物病毒中最小的一种，病毒粒子在CsC1中的浮密度为1.37g/m3，含有单股负链环状DNA，基因组长1.7kb，无囊膜，不具凝血活性，对环境的抵抗力很强，可抵抗pH3.0的环境，经氯仿作用或56作用30分钟不失活。PCV只在猪原和Vero细胞培养物中才能完全复制，并且依赖细胞周期S期表达的细胞蛋白。但在细胞进入S期前用300mM的D-氨基葡萄糖-盐酸处理细胞30分钟，
3、可以促进病毒的复制。PCV可以在PK-15细胞上增殖但不引起明显的细胞病变。对PCV复制的分子生物学研究发现：PCV以滚环方式进行复制成双链，每条链都可以转录并编码一些蛋白质。,二、流行病学1宿主和传染源：猪是PCV的主要宿主，此外也有从牛中检测到PCV的报道。Allan（94）报道在牛、绵羊、鸡、火鸡、山羊、老鼠、兔子和人的血清中未检测到PCV-1抗体，但Tischer（95）报道用间接免疫荧光和ELISA相结合的方法在人、老鼠和牛中检测到了PCV-1抗体，抗体阳性率分别为：30.2%、12-69%和35%。因此对于PCV到底是否感染人、老鼠、牛等其它动物还有待于进一步研究。,2传播方式：P
4、CV对猪有较强易感性，可经口腔、呼吸道感染不同年龄的猪，其它未接种猪的同居感染率高达100%。猪感染PCV-2后，可于5-12周龄时发生PMWS，发病率为5%-15%，死亡率可达50%。少数怀孕母猪感染PCV后，可经胎盘垂直感染给仔猪。感染猪可自鼻液、粪便等废物中排出病毒，引起病毒在不同猪个体之间进行传播。鸟类、啮齿动物如鼠等带毒，可能会引起传播。外观正常的公猪精液中可检测到PCV。混群、应激、高密度饲养等因素可诱发仔猪发病。,3流行与分布：自PCV发现以来，PCV-1和PCV-2已经证实为世界性流行和存在的病毒。我国由郎洪武等2001年首次报道了从猪群中分离到了PCV-2病毒，周继勇（200
5、2）对浙江省11个地方进行了PCV-2感染的血清学调查，结果显示，所有被调查猪场均有PCV-2感染，猪的PCV-2感染率为58%，成年种猪的感染率高于断奶猪的感染率；我室用自行研制的ORF2-ELISA诊断试剂盒对对湖北、江西、上海、湖南、河南五省的送检血清进行了检测。PCV-2血清总阳性率为52.8%，仔猪阳性率为28%，肥猪阳性率为50%，母猪阳性率为67.4%，说明PCV-2在我国猪群中感染情况已经相当严重。,三、PCV-2相关疾病1断奶仔猪多系统衰弱综合症（PMWS）本病由Clark于1996年首次报道，随后美洲、欧洲和亚洲各国相继报道了该病。目前PMWS已经成为了严重危害养猪业的一种
6、世界性传染病，并引起了国际兽医界的高度关注。2003年在韩国召开的第一界亚洲猪病会上，PMWS是会议的重要内容之一。,临床症状与病理变化：患猪表现为肌肉衰弱无力、下痢、呼吸困难、黄疸、贫血、生长发育不良，腹股沟淋巴结肿胀明显，发病率为5-30%，死亡率为5-40%不等，康复猪成为僵猪。剖检可见淋巴结肿大、肝硬变、多灶性粘液脓性支气管炎。肺脏和淋巴结是最主要的受损伤的器官。可引起肺脏衰竭或萎缩导致斑点状阴影弥散。组织学上可见肉芽肿性间质性肺炎，常伴有巨细胞的存在，气管上皮坏死或脱落并演发为细支气管炎。在上皮细胞的核内和嗜菌细胞的胞质内存在PCV-2抗原。在有些感染猪经常出现全身性的淋巴结病，尤其
7、是腹股沟、肠系膜、支气管以及纵隔淋巴结表现显著。,在有些感染猪经常出现全身性的淋巴结病，尤其是腹股沟、肠系膜、支气管以及纵隔淋巴结表现显著，切面呈白色均质状。在淋巴结中可见B细胞滤泡减少而T细胞扩散，导致大量的组织细胞和多核巨细胞浸润。疾病的中早期在淋巴组织的B细胞依赖区可见嗜碱性胞质内包含体成束聚集或随机分布于淋巴结。在树突状细胞以及单核巨嗜细胞的细胞质内可以发现大量的PCV-2抗原。此种情况在脾脏和集合淋巴结也类似。肝脏可见温和性黄疸以及明显的小叶间结缔组织萎缩。早期的组织学损伤包括淋巴组织细胞浸润及单个肝细胞坏疽。在肾脏皮质可见弥散性白色斑点并经常伴有骨盆周围水肿，组织学上在骨盆周围水肿
8、和增生组织可见多灶性淋巴组织细胞和嗜酸性细胞浸润，还可见非脓性血管炎。通常PCV-2抗原分布于被感染的管状上皮细胞和单核巨嗜细胞的细胞核内。在胰腺中可见通常与淋巴组织细胞浸润相关的腺泡和导管上皮出现多灶性萎缩和再生。在这些腺泡和导管上皮细胞的细胞核内可以检测到PCV-2抗原。感染个体间的损伤因病毒毒力、再次感染、感染时期、宿主遗传以及免疫应答的情况不同而存在差异。,2、皮炎和肾病综合症（PDNS）此病通常发生在8-18周龄的猪。首次报告于1993年，随后在美国、欧洲和南非、亚洲均有报道。此症的发病率为0.15-2%，有时候达到7%。皮肤出现红紫色病变斑块，在会阴部和四肢最明显，这些斑块有时会相
9、互融合。在极少情况下皮肤病变会消失。病猪表现皮下水肿，食欲丧失，有时体温上升。通常，病猪在3天内死亡，有时可以维持2-3周。病理组织学变化为出血性坏死性皮炎和动脉炎以及渗出性肾小球性肾炎和间质性肾炎，并因而出现胸水和心包积液。,3、间质性肺炎间质性肺炎主要危害6-14周龄的猪，发病率在2-30%之间，死亡率在4-10%之间。眼观病变为弥漫性间质性肺炎，颜色灰红色。有时可见肺部存在型肺细胞增生区和细支气管上皮坏死并含坏死细胞碎片的区域，肺泡腔内有时可见透明蛋白。,4、繁殖障碍研究表明PCV-2感染可以造成繁殖障碍，导致母猪返情率增加、产木乃伊胎、流产以及死产和产弱仔等。此外，PCV-2还可以引起
10、仔猪的先天性震颤。,五、致病机理PCV-2主要侵害机体的免疫系统，单核细胞和巨嗜细胞是PCV-2的靶细胞。感染PCV-2后，可导致T淋巴细胞和B淋巴细胞的减少，从而造成机体的免疫抑制。但单独感染PCV-2往往不能引发严重的损伤，只有当单核细胞和巨嗜细胞中的PCV-2超过一定量时才会引发PMWS而致病。在这一过程中，混合感染PRRSV、PPV和PRV可能起着重要作用。因为一方面PRRSV、PPV可以促进PCV-2在体内的增值，加速向PMWS方向转变，另一方面由于PCV-2导致的免疫抑制会降低机体对其它病原的免疫能力，从而造成更严重的疾病。,Allan等用PCV-2与PRRSV混合液接种未吃初乳的
11、仔猪，结果发现，相对于只接种PCV-2的仔猪，PRRSV有助于PCV-2在猪体内的繁殖与分布：PPV也有类似PRRSV的作用，促进PCV-2的繁殖与分布：单核细胞和巨噬细胞可能是这三种病毒的共同靶细胞。该结果从理论上解释了为什么PCV-2与PPV或PRRSV协同感染可以导致仔猪出现严重的PMWS临床症状和病理变化。,在一定条件下，免疫刺激可能也有助于PCV-2在猪体内的复制，对PMWS临床症状的形成有促进作用。Krakowka等用PCV-2接种1日龄无菌猪，在3和7日龄注射KLH（Keyhole Limpet Haemocyanin）的弗氏不完全佐剂混合物。结果显示：只接种PCV-2的仔猪无一
12、出现PMWS症状：但接种过PCV-2和KLH弗氏不完全佐剂混合物的仔猪都表现出中等或严重的PMWS症状。Kyriakis等，同一批来自曾经发生过PMWS猪场的仔猪进行试验，结果发现：分别接种过支原体性肺炎疫苗和免疫增强剂的两组实验猪群PMWS的发病率为42.9%和50%，明显高于阴性对照组。,六、诊断该病仅靠临床症状难以确诊，因此主要靠实验室诊断。实验室诊断方法可分为抗体和抗原检测法。检测抗体的方法有：间接免疫荧光、免疫组织化学法、酶联免疫吸附试验和单克隆抗体法等。但由于PCV-1和PCV-2的同源性较高，存在一定的血清学交叉反应，故上述方法不能达到鉴别诊断PCV-1和PCV-2的目的。随着对
13、PCV分子生物学研究的深入，人们发现PCV-1和PCV-2的ORF2表达蛋白之间无交叉反应，因此一种利用PCV-2ORF2表达蛋白建立的特异性ELISA方法孕育而生。该方法可以达到鉴别诊断PCV-2的目的，因此可以用于临床上大规模的流行病学调查。,目前，我室已经成功建立了ORF2-ELISA诊断方法并研制了诊断试剂盒。检测抗原的方法主要有：病毒分离鉴定、组织原位杂交和PCR方法等。病毒分离鉴定：取患猪的淋巴结、肺脏经匀浆除菌处理后，接种到没有污染圆环病毒的PK-15细胞中传代扩大培养后做动物回归试验或经电子显微镜直接观察病毒离子。组织原位杂交：用放射性或生物素标记的PCV-2的特异性探针与患猪
14、组织中的病毒核酸进行分子杂交，经放射自显影或特异性染色后即可达到诊断的目的。该方法特异性和灵敏性很高，而且利用PCV-1和PCV-2特异性探针也可以达到鉴别诊断的目的。此外该方法还可以直接显示病毒在组织细胞中分布，对研究病毒致病机理有重要意义。,PCR：设计PCV-1和PCV-2的特异性引物，进行PCR扩增，可以从病料中扩增出PCV的特异性DNA片段。该方法是一种高度准确和灵敏的诊断方法，可用于PCV的临床常规检测。此外，我室还建立了一种多重PCR方法，可以用于同时检测PCV-2，PPV和PRV病毒核酸。,七、控制策略对PCV-2综合防制主要应从以下四个方面着手。1减少断奶仔猪应激：避免仔猪过
15、早断奶，断奶后更换饲料：避免断奶后并窝并群：避免过早或多次注射疫苗；避免高密度饲养。2强化猪场生物安全：即减少后备母猪的购进数量，加强猪舍环境消毒，实行全进全出制度。,3实施严格的防疫制度：对于分娩舍应清理粪池和粪沟，彻底冲洗消毒：清洗母猪，并进行驱虫治疗；仔猪寄养限在24小时之内，并尽量减少寄主和并窝；母猪采用合理的免疫接种程序。对于断奶仔猪舍应采用小栏饲养，栏与栏之间须有实体分隔墙；清理粪池和粪沟，冲洗和消毒；仔猪入栏时降低饲养密度：确保良好的通风和理想的温度；不混群。对于生长发育成猪舍应小群饲喂，有实体隔墙；清理粪尿排出系统，冲洗消毒；降低饲养密度饲养；注意通风和温度；栏与栏之间不混群，
16、不同月龄的猪群分开饲养。,4做好疫病的综合防制：由于猪2型圆环病毒单独感染一般不会造成多大危害，而在其它病原的协同作用下可以导致严重的经济损失，因此，在规模化猪场中做好伪狂犬、细小病毒、蓝耳病、胸膜肺炎、副猪嗜血杆菌病等疾病的综合防制，是间接控制圆环病毒的重要策略之一。,4.1 PMWS：控制药物（预防）附优特乐；4.2 PDNS：控制继发感染万特肺灵；控制皮肤感染，抗寄生虫药物乐去虫；皮肤细菌感染，0.1%高锰酸钾水冲洗皮肤，青霉素G控制链球菌、坏死杆菌引起的皮肤病。4.3 间质性肺炎：控制感染药物万特肺灵。,4.4 繁殖障碍：生殖道有恶露的处理，流产后或产后48h内注射前列腺素F2(10mg)。0.1%的高锰酸钾冲洗子宫生理盐水冲洗子宫青霉素、链霉素子宫投药宫炎清栓剂。带有发热，全身症状严重者，青链霉素肌注给药一疗程。5、接种疫苗：目前世界上还没有一种商品化的疫苗用于PCV-2的免疫预防。因此，在目前，加强饲养管理、控制病毒传播是最有效的手段。,
