1、实验三病料的触片染色及细菌的分离培养 一 .实验目的与要求 1.培养无菌操作的意识 2.掌握病料的正确触片及美兰染色方法 3. 掌握病料细菌分离的操作步骤及其分区划线二 .实验仪器及材料 1. 仪器：恒温箱、显微镜等 2 .实验材料：培养基：麦康凯培养基、胰蛋白胨大豆琼脂（ TSA）病料：猪肺、肝脏、脾脏等酒精灯、接种环、剪刀、接种环、镊子等染色液：美兰染色液 三 .内容与方法 1.病料触片染色： 灼烧剪刀、镊子从病料上剪取小块组织 用新鲜切面在干净载玻片上轻触 3 4个 触面 自然干燥 美兰染色。 2.美兰染色步骤： 触片经过火焰固定 滴加适量美兰染色液覆盖涂面 染色 3分钟 晾干 镜检 菌
2、体呈蓝色。用灭菌的烙刀（趁热）对病料的表面进行灭菌 用灭菌的剪刀在病料上灭过菌的地方剪一切口 接种环灭菌，从切口取细菌 无菌操作进行平板分区划线 用过的剪刀、镊子、烙刀、接种环等烧灼灭菌 平板放入恒温箱中 18-24 小时 观察培养后的细菌菌落性状。3.病料中细菌的分离培养：4.分区划线 右持接种环，烧灼冷却后，蘸取划线。 左手抓握琼脂平板，在酒精灯火焰左上方，使平板面向火焰，右手将已沾的病料接种环在琼脂表面分区划线 划线完毕，将接种环烧灼。 将平板倒扣并做标记，培养。划线及其结果分区划线有单菌落划线模示图有单菌落四 .结果及分析讨论 1 病料触片染色结果及其分析 2 细菌培养结果及其分析五 .注意事项 1 病料触片不易过厚 2 无菌意识 3 分区划线时小心划破培养基 4 病料正确处理 5 病料采集的时间，及运输保存六 .作业 1.撰写试验报告，下次上实验课时交。 2.考核：涂片老师看后，当场打分（ 5分） 3.卫生：包括实验结束后实验及地面卫生，显微镜等实验仪器及试剂摆放是否标准（ 5分）。 4 .病料中细菌分离培养的步骤？ 5 .如何做好平板的分区划线？
