1、教学目标 :1、知道纤维素酶的种类及作用2、初步掌握从土壤中分离出分解纤维 素的微生物的实验方法1、纤维素在生物圈的分布状况?2、纤维素酶的组成及作用?纤维 素是地球上含量最丰富的多糖 类 物 质 。植物的根、茎、叶等器官都含有大量的 纤维 素。其中 棉花 是自然界中 纤维 素含量最高的天然 产 物。纤维 素 酶 是一种复合 酶 ,一般 认为 它至少包括三种组 分,即 CX酶 、 C1酶 和 葡萄糖苷 酶 ,前两种 酶 使 纤维 素分解成 纤维 二糖 ,第三种 酶 将 纤维 二糖分解成 葡萄糖 。一、 纤维 素和 纤维 素 酶纤维素是由葡萄糖单体聚合形成的高分子纤维素是由葡萄糖单体聚合形成的高
2、分子化合物化合物 ,分子组成分子组成 (C6H10O5)n。二、 纤维 素分解菌的 筛选1、纤维素分解菌的筛选方法2、纤维素分解菌的筛选方法的原理刚果红染色法 :这种方法能够通过颜色反应直接 对微生物进行筛选 刚果红 是一种染料,它可以 与纤维素形成红色复合物 ,但并不和纤维二糖、葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后刚果红 纤维素的复合物就无法形成,培养基中会出现以纤维素分解为中心的 透明圈 。这样我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌练 一 练 :1、下列关于纤维素酶的说法,错误的是A、纤维素酶是一种复合酶,至少包括三种B、纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C、纤维素酶可用于去掉植
3、物的细胞壁D、葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖2、利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌,下列说法错误的是A、刚果红能与纤维素形成红色复合物 B、刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C、刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物D、若培养基上产生了透明圈,则说明已筛选出了纤维素分解菌三、 实验 操作土壤取样 选择培养 梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落土壤取 样取样的环境是怎样的,作出这种选择的理由是什么?选择纤维素丰富的环境,如树林中多年落叶形成的腐殖土,多年积累的枯枝败叶等等。生物与环境的互相依存关系,在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高,因此从这种土壤中获得目的
4、微生物的几率要高于普通环境选择 培养1、选择培养的目的:增加纤维素分解菌的浓度,以确保能够从样品中分离到所需要的微生物2、制备选择培养基a、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基?为什么?b、这个培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有,是如何进行选择的?c、你能否设计一个对照实验,说明选择培养基的作用是液体培养基,原因是配方中无凝固剂有选择作用,本配方中的碳源是纤维素,所以能分解纤维素的 微生物可以大量繁殖用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照3、操作方法:将土样加入装有 30ml选择培养基的锥形瓶中,将锥形瓶固定在摇床上,在一定温度下震荡培养 1 2天,直至培养液变浑浊。也可重复选择培养思考: 为什么选择培养能够 “浓缩 ”所需的微生物?在选择培养的条件下,可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖,而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制,因此可以起到 “浓缩 ”的作用梯度稀 释按照课题 1 的稀释操作方法,将选择培养后的培养基进行等比稀释,稀释最大倍数到 106