1、u考点 40 微生物的培养、分离及计数u考点 41 传统发酵技术的应用第十五章 微生物的培养与应用l 高考考法突破 考法 1 微生物的培养与纯化l 应试基础必备u考点 40 微生物的培养、分离及计数 考法 2 微生物的分离、筛选与计数l 应试基础必备(1)培养基概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养物质。成分：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，还需满足不同微生物生长对 pH、特殊营养物质以及氧气的需求。培养基的制备：计算 称量 溶化 灭菌 倒平板。(2)无菌技术关键：防止外来杂菌的入侵。方法：实验室中常用紫外线或化学药物消毒，如用酒精擦拭双手；灭菌的方法主要有灼烧灭
2、菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。 1微生物的培养(3)实验操作 制备固体培养基a步骤：计算 称量 溶化 灭菌 倒平板。b倒平板操作时待培养基冷却至 50 左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 纯化菌 种a原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成 单个 菌落，这个菌落就是 一个 纯化的细菌菌落。b方法： 平板划线 法 、 稀释涂布平板 法 。 菌种的保藏a 临时 保存：固体斜面培养基上 4 保存，菌种易被污染或产生变异。b 甘油 保存：甘油瓶中 20 冷冻箱中保藏。 2土壤中分解尿素的 细 菌的分离与 计 数(1)筛选菌株原理： 人为提供有利目的菌生长的条件，同时 抑制或阻止 其他微生物的生
3、长。(2)统计菌落数目的方法 显微镜直接计数法a原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算 一定容积 的样品中微生物的数量。b方法：用计数板计数。c缺点：不能区分死菌与活菌。 间接计数法 (活菌计数法 )A原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有多少活菌。B计算公式：每克样品中的菌株数 (CV)M，其中 C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数， V代表涂布平板时所用的稀释液的体积 (mL)， M代表稀释倍数。C操作a设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b为了保证结果准确，一般选择菌落数在
4、30 300的平板进行计数。(3)实验流程：土壤取样 制备培养基 微生物的培养与观察 细菌的计数。 3培养基 对 微生物的 选择 作用(1)纤维素酶纤维素酶是一种复合酶，它包括 C1酶、 CX酶和葡萄糖苷酶，具有催化分解纤维素的作用，其作用过程如下：(2)纤维素分解菌的筛选原理以纤维素作为唯一碳源的选择培养基上，刚果红纤维素 红色复合物，纤维素分解菌可分泌纤维素酶，分解纤维素使红色消失，出现透明圈。即：可根据透明圈来筛选纤维素分解菌。(3)土壤中纤维素分解菌的筛选流程土壤取样 (要在富含纤维素的环境中取样 )选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落。l
5、高考考法突破1.对培养基的认识 考法 1 微生物的培养与纯化（） (1)培养基的成分(2)培养基的分类划分标准 培养基种类 特点 用途物理性质液体培养基 不加凝固剂 工业生产固体培养基 加凝固剂，如琼脂 对微生物分离、鉴定等用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，用来抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长培养和分离出特定微生物 (如分离细菌和真菌，可以在培养基中加入青霉素 )鉴别培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌 (若有，则菌落呈黑色并带有金属光泽 )(3)培养基的配制原则 目的要明确：根据微生物的种类、培养目的等选择原料配制培养基，如培养自养型的微生物就不用加入有机营养物质。 营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。 pH要适宜：各种微生物适宜生长的 pH范围不同。
